[發明專利]融合蛋白

有效

• 申請號: 202110661610.6
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN113501881B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 李毓龍;井淼;馮杰思;萬金霞;王歡
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;C12Q1/66;C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 彭鯤鵬

1.基于G蛋白偶聯受體構建的熒光探針，所述熒光探針是對G蛋白偶聯受體進行改造獲得的融合蛋白，所述改造包括在G蛋白偶聯受體的第五跨膜區和第六跨膜區之間的第三胞內環中插入循環重排的螢光素酶；其中

所述G蛋白偶聯受體是與特異性配體特異性結合的G蛋白偶聯受體；

所述基于G蛋白偶聯受體構建的熒光探針能夠在細胞膜上表達；并且

所述基于G蛋白偶聯受體構建的熒光探針當與所述G蛋白偶聯受體的特異性配體接觸時可以與其結合，由此導致熒光探針的熒光強度具有可檢測到的變化。

2.權利要求1的熒光探針，其中所述改造包括對G蛋白偶聯受體的第五跨膜區和第六跨膜區之間的第三胞內環截短并在截短的位置插入循環重排的螢光素酶。

3.權利要求2的熒光探針，其中所述循環重排的螢光素酶兩端分別通過連接肽與G蛋白偶聯受體的第三胞內環相連。

4.權利要求3的熒光探針，其中所述連接肽包括柔性氨基酸。

5.權利要求4的熒光探針，其中所述柔性氨基酸包括甘氨酸和/或丙氨酸。

6.權利要求5的熒光探針，其中所述連接肽由甘氨酸和丙氨酸組成。

7.權利要求6的熒光探針，其中所述循環重排的螢光素酶N端的連接肽為GG，和/或循環重排的螢光素酶C端的連接肽為GGAAA。

8.權利要求1的熒光探針，其中所述特異性配體是神經遞質、激素、代謝分子、營養分子、或人工合成的激活特定受體的小分子或藥物；所述G蛋白偶聯受體是與神經遞質、激素、代謝分子、營養分子、或人工合成的激活特定受體的小分子或藥物特異性結合的G蛋白偶聯受體。

9.權利要求8的熒光探針，其中所述神經遞質是腎上腺素、去甲腎上腺素、乙酰膽堿、五羥色胺和/或多巴胺。

10.權利要求8的熒光探針，其中所述人工合成的激活特定受體的小分子或藥物是異丙腎上腺素(ISO)。

11.權利要求1的熒光探針，其中所述G蛋白偶聯受體是人源的或動物源的。

12.權利要求1的熒光探針，其中基于G蛋白偶聯受體構建的熒光探針是用于檢測腎上腺素的熒光探針，其中所述G蛋白偶聯受體是特異性結合腎上腺素的GPCR。

13.權利要求12的熒光探針，其中所述特異性結合腎上腺素的GPCR是人β2腎上腺素受體，所述基于G蛋白偶聯受體構建的熒光探針是基于人β2腎上腺素受體構建的熒光探針。

14.權利要求13的熒光探針，其中循環重排的螢光素酶通過N端和C端的連接肽與人β2腎上腺素受體的第三胞內環相連。

15.權利要求14的熒光探針，其中循環重排的螢光素酶兩端的連接肽的長度分別是氮端為1個或2個氨基酸，和/或碳端為1個、2個、3個、4個或5個氨基酸。

16.權利要求15的熒光探針，其中循環重排的螢光素酶兩端的連接肽的長度分別是氮端為2個氨基酸，碳端為5個氨基酸。

17.權利要求16的熒光探針，其中循環重排的螢光素酶兩端的連接肽分別是N端為GG，C端為GGAAA，或者循環重排的螢光素酶兩端的連接肽分別是N端為GG，C端為SPSVA，或者循環重排的螢光素酶兩端的連接肽分別是N端為GG，C端為APSVA。

18.權利要求15的熒光探針，其中循環重排的螢光素酶兩端的連接肽的長度分別是氮端為1個氨基酸，碳端為1個氨基酸。