[發明專利]一種用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 202110659414.5
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113403381A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 劉丹;李麗
• 申請（專利權）人: 湖南菲思特精準醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

本發明公開了一種用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用，其中，所述試劑盒用于檢測他汀類藥物療效相關基因ApoE T388C和ApoE C526T兩個基因的多態性，試劑盒包括如下組分：擴增反應液、ApoE T388C擴增引物、APOE T388C測序引物、ApoE C526T擴增引物、ApoE C526T測序引物和陽性對照。本發明采用多重RPA擴增和優化焦磷酸測序技術為組合對他汀類藥物療效的相關的基因多態性進行檢測，試劑盒可同時檢測ApoE(T388C)、ApoE(C526T)基因多態性汀類藥物，為臨床個性化用藥給出基因角度的建議。

技術領域

本發明涉及一種用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用，屬于基因檢測領域。

背景技術

根據我國流行病學調查，中國成人血脂異常總體患病率在2012年高達40.40％，較10年前呈大幅度上升，血清總膽固醇(TC)水平的升高將導致未來中國心血管病事件增加約920萬。他汀類藥物在ASCVD一級和二級預防中均能顯著降低心血管事件風險，是防治此類疾病最為重要的藥物。然而不同的他汀在化學結構上雖有相似之處，但它們在藥代動力學、與其他藥物相互作用、藥物療效以及他汀導致的不良反應方面存在個體間的差異，而這些差異部分是歸因于常見藥物基因的遺傳與變異。載脂蛋白E(ApolipoproteinE，ApoE)是一種存在于乳糜微粒和中間密度脂蛋白中的載脂蛋白，主要由肝臟和巨噬細胞產生，參與血脂的運輸、存儲和排泄。

載脂蛋白E(ApoE)通過多種途徑參與機體的脂質代謝調節，是影響機體血脂水平的重要內在因素。ApoE多態性被認為是高脂蛋白血癥及動脈粥樣硬化性血管病的易感候選基因。人類ApoE基因定位于19號染色體上，有4個外顯子和3個內含子，主要有兩種單核苷酸多態性526CT和388TC，可以形成3種單倍型分別是ApoE3(388T-526C)、ApoE2(388T-526T)、ApoE4(388C-526C)。文獻報道，ApoE4攜帶者患冠心病的風險要高40％，并且他汀類藥物對ApoE4攜帶者療效往往不佳或無療效，而對ApoE2攜帶者的降脂作用最強。目前FDA已將APOE2列為普伐他汀藥物反應相關的生物標記。

目前，對于基因多態性檢測的方法有很多種，如直接測序法、芯片法、高分辨率熔解曲線法、等位基因特異性擴增法、taqman熒光探針法等。其中，測序法和芯片法，操作步驟繁瑣，檢測周期長，且擴增產物容易產生污染；高分辨率熔解曲線法步驟簡單，特異性偏低，且對儀器設備的要求較高；等位基因特異性擴增法采用ARMS引物進行特異擴增，其引物設計難以最優化，檢測條件要求嚴格。Taqman熒光探針法其試驗成本高，對于多個基因的擴增通量不高。因此，需要建立一種簡單、快速有效、價格低廉、特異性高的檢測基因多態性的方法。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明的目的是以用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用為基礎，獲得一種用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

為實現上述發明目的之一，本發明采用的用于他汀類藥物療效預測的檢測試劑盒及其檢測方法和應用的技術方案如下：

本發明的檢測試劑盒針對ApoE(T388C)、ApoE(C526T)兩個基因的多態性設計特異性擴增引物和測序引物，所述試劑盒包括如下組分：試劑1、試劑2、ApoE(T388C)測序引物、ApoE(C526T)測序引物、陽性對照。

優選地，所述設計特異性引物，如下表所示：

優選的，所述ApoE(T388C)的特異性引物組序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQ IDNO:2所示；所述ApoE(C526T)的特異性引物組序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQ ID NO:4所示。

優選的，所述的ApoE(T388C)測序引物、ApoE(C526T)測序引物分別如序列表SEQID NO:5～SEQ ID NO:6所示。