[發(fā)明專利]用于檢測乏氧水平的熒光探針、其制備方法及其應用

有效

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• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113354583B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設計）人: 崔雷;楊文祥;顧方圓;李健
• 申請（專利權(quán)）人: 上海大學
• 主分類號: C07D221/14
• 分類號: C07D221/14;C09K11/06;G01N21/64;A61K49/00;A61K31/473;A61P35/00
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種用于檢測乏氧水平的熒光探針，其特征在于：其分子結(jié)構(gòu)如下：簡稱G-1，對Na₂S₂O₄具有特異性響應。

2.一種權(quán)利要求1所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備化合物1：

在冰浴條件下，將1,8-萘二甲酸酐溶解在質(zhì)量百分比濃度不低于70wt％的濃硫酸中，在滴液漏斗中裝入含質(zhì)量百分比濃度不低于68wt％濃硝酸的濃硫酸溶液，緩慢滴加進入1，8-萘二甲酸酐溶液中，在室溫條件下攪拌反應；隨后，倒入冰水，在冰醋酸中重結(jié)晶，其中化合物1的結(jié)構(gòu)式如下：

(2)制備化合物2：

在單口燒瓶中加入用乙醇溶解的化合物1和質(zhì)量百分比濃度不低于38wt％濃鹽酸溶液，緩慢加入無水氯化亞錫，回流，反應完全后加水稀釋，抽濾，其中化合物2的結(jié)構(gòu)式如下：

(3)制備化合物3：

在單口燒瓶中依次加入化合物2、乙醇、N,N-二甲基乙二胺，然后加熱回流，待反應液冷卻至室溫則有黃色沉淀析出，分別用冰乙醇、石油醚溶液洗滌至少兩次，真空干燥，其中化合物3的結(jié)構(gòu)式如下：

(4)制備化合物4：

在冰浴條件下，在攪拌過程中將N,N-二羥乙基苯胺緩慢加入含三氯氧磷的圓底燒瓶中，室溫下進行反應；緩慢加入甲苯，冰水，反復多次萃取后，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑，其中化合物4的結(jié)構(gòu)式如下：

(5)制備化合物G-1：

在冰浴條件下，將化合物3溶解在次氯酸溶液中，用水溶解后的亞硝酸鈉分多次加入緩慢加入體系之中，常溫下反應；然后緩慢加入化合物4，繼續(xù)反應；將混合溶液的pH調(diào)至6～7，繼續(xù)反應一段時間后，將pH調(diào)至不低于7，用二氯甲烷萃取產(chǎn)物，合并有機相，用無水硫酸鈉干燥，再用硅膠柱層析提純，即得到可用于檢測乏氧水平的探針化合物G-1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于：在所述步驟(1)中，在滴液漏斗中裝入至少10mL含51.0mmol濃硝酸的濃硫酸溶液，在冰浴條件下，緩慢將其滴加至至少20mL含50.5mmol的1,8-萘二甲酸酐的濃硫酸溶液中，在室溫條件下反應至少90min；反應完全后，在冰醋酸中重結(jié)晶，得到化合物1。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于：在所述步驟(2)中，在單口燒瓶中加入含8.2mmol化合物1的乙醇溶液，冰浴條件下滴加不少于5mL濃鹽酸，隨后緩慢加入54.4mmol無水氯化亞錫，在不低于80℃條件下至少回流至少5h，反應完全后加水析出固體，抽濾，得到化合物2。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于：在所述步驟(3)中，在單口燒瓶中依次加入9.4mmol化合物2、9.9mmol?N,N-二甲基乙二胺和至少20mL乙醇，然后加熱回流不少于5h，待反應液冷卻至室溫則有沉淀析出，分別用冰乙醇、石油醚溶液洗滌兩次，真空干燥，得到化合物3。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于：在所述步驟(4)中，在冰浴條件下，在攪拌過程中緩慢將55.2mmol?N,N-二羥乙基苯胺加入含110.3mmol的三氯氧磷圓底燒瓶中，室溫反應不少于2h；反應完畢后，冰浴條件下緩慢加入冰水以除去多余的三氯氧磷，并用甲苯萃取至少三次，合并有機相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓除去溶劑，得到化合物4。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的制備方法，其特征在于：在所述步驟(5)中，在冰浴條件下，將0.3mmol化合物3溶解在鹽酸溶液中，然后分多次緩慢滴加用水溶解的亞硝酸鈉溶液，室溫反應至少30min；隨后，緩慢加入化合物4，反應至少30min；再將pH調(diào)至6～7，反應不少于30min；最后，將pH調(diào)至不低于7，用二氯甲烷萃取，合并有機相，經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，柱層析分離純化，得到探針化合物G-1。

8.一種權(quán)利要求1所述用于檢測乏氧水平的熒光探針的應用，其特征在于：用于定性檢測Na₂S₂O₄，用于體外或體內(nèi)乏氧水平的檢測。