[發明專利]基于金屬編碼技術的核酸檢測方法

在審

• 申請號: 202110658757.X
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113355393A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 呂聰;俞曉峰;李銳;鄭寧寧;李艷曉;卓王濤;韓雙來
• 申請（專利權）人: 杭州譜育科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;G01N27/62
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，所述基于金屬編碼技術的核酸檢測方法為：

使用金屬對磁珠進行編碼，將目的基因的探針與所述磁珠偶聯，得到金屬編碼的探針磁珠；

提取基因，利用修飾了生物素的引物進行擴增；

金屬編碼的探針磁珠和擴增后的基因共孵育；

加入金屬標記的親和素與所述生物素結合，去除多余成分，之后送質譜儀檢測；標記所述親和素的金屬和對磁珠編碼的金屬不同；

使用質譜技術獲得親和素中金屬離子的含量；

利用獲得的金屬離子含量及映射關系得到基因的信息，所述映射關系是金屬離子含量與基因的信息間的對應關系。

2.根據權利要求1所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，使用金屬編碼磁珠的方式為：

使用不同質量數的金屬鹽溶液與中間體孵育，形成金屬離子螯合物；

金屬離子螯合物或若干種不同的金屬離子螯合物的組合分別與不同磁珠反應結合；去除過量的金屬離子螯合物；

加入化學活化試劑，活化不同磁珠表面基團，加入經修飾后的核酸探針，并孵育，所述核酸探針包括針對單一基因的多位點探針以及多基因檢測的探針組合；去除過量的目的基因探針。

3.根據權利要求1所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，基因的提取方式為：

使用RNA提取試劑盒提取總RNA，使用逆轉錄試劑盒對總RNA進行逆轉錄得到cDNA。

4.根據權利要求1所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，所述映射關系的獲得方式為：

制備具有梯度濃度的核酸標準品；

使用所述檢測方法檢測所述核酸標準品，獲得金屬離子含量，從而得到金屬離子含量和核酸濃度間的對應關系。

5.根據權利要求4所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，所述核酸標準品為多種，每一梯度濃度的多種核酸標準品的濃度相同。

6.根據權利要求1所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，在質譜檢測中，離子化的具體方式為：

馬達轉動，轉換模塊將馬達的轉動轉換為滑動件的直線移動；

將所述滑動件的直線移動轉換為轉換件的豎直移動，從而帶動與所述轉換件連接的承載件沿著多個導向件豎直移動，設置在所述承載件上的承載單元隨著所述承載件豎直移動；炬管豎直地設置在所述承載單元上，線圈固定在所述承載單元上，并與所述炬管保持相對靜止；

在水平方向上二維調節所述承載單元的位置，所述承載單元設置在二維調節單元上，所述二維調節單元設置在所述承載件上；

樣本進入所述炬管內，通過所述線圈激發成等離子體，從而形成離子；

所述離子穿過采樣錐后進入質譜分析單元。

7.根據權利要求1所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，在質譜檢測中，使用飛行時間質量分析器，所述飛行時間質量分析器包括推斥極、無場飛行區和檢測器，所述無場飛行區包括第一入射柵網；所述飛行時間質量分析器還包括：

牽引電極，所述牽引電極和所述第一入射柵網間形成第一離子加速區；

第一柵網和第二柵網，所述第一柵網和第二柵網間電勢差為零；所述推斥極和第一柵網間，以及第二柵網和牽引電極間形成第二離子加速區；離子依次穿過第一柵網、第二柵網、牽引電極、第一入射柵網和無場飛行區，被所述檢測器接收。

8.根據權利要求7所述的基于金屬編碼技術的核酸檢測方法，其特征在于，所述飛行時間質量分析器還包括：

反射區，所述反射區包括第一反射場和第二反射場，所述第一反射場包括第二入射柵網和反射電極，第二反射場包括所述反射電極和反射板；從所述無場飛行區出射的離子被所述反射區反射，之后被所述檢測器接收。