[發(fā)明專利]LDH、表達(dá)LDH的重組質(zhì)粒、表達(dá)LDH的重組益生菌及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110657590.5
• 申請(qǐng)日: 2021-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN113604493B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳新平;劉菁菁;趙文陽(yáng);韓梁;周靜;吳桐雨;李純
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;A61K38/44;A61P1/04;A61P1/00;A61P9/04;A61P9/10;A61P9/00;A61P29/00;A61P39/00;A61P25/00;A61P7/10
• 代理公司: 北京力量專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 毛婷

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種LDH、表達(dá)LDH的重組質(zhì)粒、表達(dá)LDH的重組益生菌及應(yīng)用。本發(fā)明首先將乳酸脫氫酶LDH基因插入表達(dá)載體pET?28a中獲得了表達(dá)LDH的重組質(zhì)粒；其次將所述重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸埃希菌(Escherichia?coli)Nissle?1917耐受菌中獲得了一種功能性重組益生菌。本發(fā)明所述的重組益生菌在高效表達(dá)LDH同時(shí)，能夠有效的抑制細(xì)胞死亡、改善腦梗死體積、增強(qiáng)改善粘膜完整度、促進(jìn)組織形態(tài)改善，對(duì)消化性潰瘍、炎癥性腸病和心腦血管疾病療效顯著，且效果高于臨床藥物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種LDH、表達(dá)LDH的重組質(zhì)粒、表達(dá)LDH的重組益生菌及用于制備治療和/或預(yù)防消化性潰瘍、炎癥性腸病和心腦血管疾病藥物的應(yīng)用。

技術(shù)背景

消化性潰瘍主要指發(fā)生于胃和十二指腸的慢性潰瘍，是一種多發(fā)病、常見(jiàn)病，又稱胃、十二指腸潰瘍。潰瘍的形成有多種因素，例如胃酸分泌過(guò)多、幽門螺桿菌感染和胃粘膜保護(hù)作用減弱等因素是引起消化性潰瘍的主要環(huán)節(jié)。胃排空延緩和膽汁反流、胃腸肽的作用、遺傳因素、藥物因素、環(huán)境因素和精神因素等，都和消化性潰瘍的發(fā)生有關(guān)。上腹部疼痛為本病的主要癥狀，多位于右上腹部，也可出現(xiàn)在左上腹部或胸骨、劍突后。常呈隱痛、鈍痛、脹痛、燒灼樣痛，以出血、穿孔等并發(fā)癥作為首發(fā)癥狀。炎癥性腸病為累及回腸、直腸、結(jié)腸的一種特發(fā)性腸道炎癥性疾病，臨床表現(xiàn)主要有體重減少、里急后重、腹瀉、腹痛、甚至血便。炎癥性腸病主要包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病，潰瘍性結(jié)腸炎病變局限于大腸粘膜及粘膜下層，疾病通常先累及直腸，逐漸向全結(jié)腸蔓延；克羅恩病可累及全消化道，為非連續(xù)性全層炎癥，最常累及部位為末端回腸、結(jié)腸和肛周。目前市場(chǎng)上治療消化性潰瘍和炎癥性腸病的藥物，主要以緩解癥狀為主，無(wú)法治愈，屬于對(duì)癥治療。長(zhǎng)期使用可誘發(fā)多種不良反應(yīng)，嚴(yán)重者可引發(fā)癌變，且停藥易復(fù)發(fā)問(wèn)題，因此，仍然需要開發(fā)用于治療消化性潰瘍和炎癥性腸病的新藥物，更好的為患者服務(wù)。

腦血管疾病(Cerebrovascular?disease)，泛指腦部血管的各種疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成、狹窄、閉塞、腦動(dòng)脈炎、腦動(dòng)脈損傷、腦動(dòng)脈瘤、顱內(nèi)血管畸形、腦動(dòng)靜脈瘺等，其共同特點(diǎn)是引起腦組織的缺血或出血性意外。典型的腦血管疾病主要有腦血栓、腦缺血、腦梗塞等。腦血栓是在腦動(dòng)脈粥樣硬化和斑塊基礎(chǔ)上，在血流緩慢和血壓偏低的條件下，血液的有效成分附著在動(dòng)脈的內(nèi)膜形成血栓，成為腦血栓，臨床上以偏癱為主要臨床表現(xiàn)。腦卒中是一種急性腦血管疾病，是由于腦部血管突然破裂或因血管阻塞導(dǎo)致血液不能流入大腦而引起腦組織損傷的一組疾病，包括缺血性卒中和出血性卒中。血栓可引起腦梗的形成，腦梗又稱為缺血性腦卒中；腦血栓、腦梗塞最終均可歸結(jié)于卒中。而卒中是嚴(yán)重危害中國(guó)國(guó)民健康的重大慢性非傳染性疾病，具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率、高復(fù)發(fā)率和高經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)五大特點(diǎn)。隨著人口老齡化的加劇，腦血管病危險(xiǎn)因素流行趨勢(shì)更加明顯，導(dǎo)致腦血管病的發(fā)病人數(shù)持續(xù)增加。目前，臨床上面對(duì)這一危害嚴(yán)重的疾病，尚無(wú)有效的治療方法。因此，如何開發(fā)出一種能夠顯著治療缺血性腦卒中的新藥物是目前亟待解決的問(wèn)題。

如果要治愈此類疾病，有必要揭示消化性潰瘍、炎癥性腸病和腦血管疾病的關(guān)鍵病理機(jī)制，從而設(shè)計(jì)合理高效的治療藥物，完全恢復(fù)胃腸道和神經(jīng)元功能。我們認(rèn)為眾多疾病的發(fā)生根本機(jī)制都是由細(xì)胞死亡引起的。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，胃上皮細(xì)胞死亡是誘發(fā)胃潰瘍形成的關(guān)鍵病理(Modulation?of?tumor?necrosis?factor-related?apoptosis-inducingligand(TRAIL)-mediated?apoptosis?by?Helicobacter?pylori?inimmune?pathogenesisof?gastric?mucosal?damage)；腸上皮細(xì)胞死亡會(huì)導(dǎo)致腸通透性增加和腸屏障功能障礙，導(dǎo)致多種急性和慢性腸道疾病，例如炎癥性腸病(Cell?death?of?intestinal?epithelialcells?in?intestinal?diseases)；在缺血缺氧病理?xiàng)l件下，自由基、鈣離子增多可激活神經(jīng)元凋亡，從而導(dǎo)致腦功能的損害，引發(fā)腦血管疾病的發(fā)生。