[發明專利]一種基于非靶向代謝組學檢測GIST患者血漿中伊馬替尼代謝物的方法

有效

• 申請號: 202110656021.9
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113406226B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 陳燕;肖洪濤;張蕊;黃婷文麗;王秋菊;徐蓓
• 申請（專利權）人: 四川省腫瘤醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 成都環泰專利代理事務所(特殊普通合伙) 51242
• 代理人: 李斌;李輝

1.一種基于非靶向代謝組學檢測GIST患者血漿中伊馬替尼代謝物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、分別采集若干名未服用及長期規律服用IM的GIST患者的外周靜脈血，并將采集的外周靜脈血進行離心處理，然后低溫保存，得到血漿樣本；

S2、采用二維液相色譜法分析血漿樣本中IM血藥濃度，根據測出的血藥濃度值，將所述的血漿樣本分成A、B、C、D組；其中，將血漿樣本編號為1-40，采用二維液相色譜法依次分析已編號的血漿樣本中IM血藥濃度，根據測出的血藥濃度值，將IM血藥濃度＞2000ng/mL的設為A組、IM血藥濃度1100-2000ng/mL的設為B組、IM血藥濃度＜1100ng/mL的設為C組和未服用IM的GIST患者設為D組；

S3、樣本處理，分別量取100?μL的A、B、C、D組的血漿樣本轉移到1.5mL離心管中，加入300μL含有1ppm的2-氯苯丙氨酸的甲醇中使用渦旋2min，于-20℃下冰箱孵育0.5h；取孵育后的樣本渦旋2min，于4℃下12000r/min離心處理10min，收取200μL上清液轉置新的1.5mL離心管中，于-20℃下靜置0.5h；靜置后的上清液于4℃下12000r/min再次離心15min，轉置進樣瓶中，得到待測樣本，其中渦旋處理采用渦旋混合器，離心處理采用離心機，溫度設置采用超低溫冰箱；

S4、對待測樣本進行非靶向檢測，得到血漿中的代謝物原始數據；其中，非靶向檢測，采用UPLC-QTOF/MS聯用技術對待測樣本進行非靶向檢測，依次取樣，得到血漿樣本中的代謝物原始數據；

UPLC：Waters?T3?C18柱，i.d.2.1×100?mm,?1.8μm，柱溫40℃，流速0.35mL/min，進樣量2μL，0.04%乙酸/水的流動相A，0.04%乙酸/乙腈的流動相B，從開始到10min，A泵的流動相比例從95%勻速減少為5%，同時B泵的流動相比例從5%勻速增長為95%；從10min到11min保持上述比例；從11min到11.1min?A泵的流動相比例從5%勻速增長為95%，同時B泵的流動相比例從95%勻速減少為5%；保持至14min；

QTOF/MS：正離子模式下：電壓Voltage：250v；氣體流量Gas?Flow：8?L/min；碎裂電壓Fragmentor：135v；氣體溫度Gas?Temperature：325℃；鞘氣溫度Sheath?Temperature：325℃；鞘流Sheath?Flow：11?L/min；噴霧器Nebulizer：40?psi；

負離子模式下：電壓Voltage：1500v；氣體流量Gas?Flow：8?L/min；碎裂電壓Fragmentor：135v；氣體溫度Gas?Temperature：325℃；鞘氣溫度Sheath?Temperature：325℃；鞘流Sheath?Flow：11?L/min；噴霧器Nebulizer：40?psi；

S5、對原始數據進行多變量分析，并以OPLS-DA模型的變量投影重要度值，即VIP值結合t檢驗的P值以及差異倍數分析的FC值，并以VIP≥1,P0.05，FC≥2或≤0.5的條件尋找差異代謝物，檢索數據庫以定性出GIST代謝標志物；

S6、對代謝標志物進行KEGG通路分析，確定GISI患者的代謝過程，所述通路為鞘脂代謝、P450代謝、咖啡因代謝、維生素消化吸收，所述鞘脂代謝包括D-鞘氨醇、1-磷酸鞘氨醇、植物鞘氨醇、磷酸乙醇胺。

2.根據權利要求1所述的一種基于非靶向代謝組學檢測GIST患者血漿中伊馬替尼代謝物的方法，其特征在于，步驟S5中對原始數據進行多變量分析前，先將原始數據轉換成mzML格式，再對原始數據的圖譜進行峰對齊、保留時間校正和峰面積提取。

3.根據權利要求2所述的一種基于非靶向代謝組學檢測GIST患者血漿中伊馬替尼代謝物的方法，其特征在于，步驟S5中對原始數據進行多變量分析具體為：對原始數據的圖譜進行峰對齊、保留時間校正和峰面積提取后，經過Auto?scaling軟件處理，對數據進行無監督主成分分析、正交偏最小二乘法判別分析、Student’s?t-test和差異倍數分析。