[發明專利]一種分析腫瘤細胞耐藥性的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202110654859.4
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113567404A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 竇紅靜;劉靈珊
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/01
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發明公開了一種分析腫瘤細胞耐藥性的方法，該方法包括以下步驟：(a)提供一種二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯?co?聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒；(b)將所述二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯?co?聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒與腫瘤細胞共孵培養；(c)檢測腫瘤細胞對所述二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯?co?聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒的內吞性能。本發明的分析方法，能夠清楚、直觀、高效地分析出耐藥性腫瘤細胞；提供的納米粒子合成過程簡便，耗費時間短，與腫瘤細胞共孵后，采用流式細胞儀進行檢測，通過檢測結果來判斷腫瘤細胞的耐藥性的強弱，以及耐藥細胞所占的比例，方法簡單高效。

技術領域

本發明涉及腫瘤分析和治療領域，尤其涉及一種分析腫瘤細胞耐藥性的方法和試劑盒。

背景技術

癌癥是全世界范圍內威脅人類生命健康的問題，目前癌癥的治療方法主要有化療、放射治療、免疫治療等。然而在癌癥治療過程中總是有不同程度的耐藥產生，降低癌癥治療的效果。其中，化療時發生的多藥耐藥是腫瘤化療面臨的主要挑戰。化療的多藥耐藥可由多種原因導致，最為常見的是p-糖蛋白的表達使得化療藥物被泵出細胞，化療藥物不能在細胞中累積達到殺死細胞的濃度，進而達不到治療效果。所以，針對腫瘤化療的多藥耐藥，分析其耐藥細胞與非耐藥細胞具有重要意義。

中國專利CN111440840A公開了一種利用多糖基納米顆粒分析腫瘤細胞耐藥性的方法。但是這種親水性的納米顆粒穿過脂溶性的細胞膜尚存在局限性，并且這種納米顆粒合成過程較為復雜，實驗條件要求高，耗時長。

有鑒于現有技術的缺陷，發明人引入了具有不同表面特性的納米顆粒，分別是二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒和金屬有機框架納米顆粒。這些納米顆粒合成過程簡便，后處理耗費時間短，且表面特性更有利于穿過細胞膜并被細胞內吞。通過對納米顆粒進行熒光標記或表面修飾，使納米顆粒具有通過特異性的內吞性能來分析耐藥性腫瘤細胞的能力，并以此為手段研究腫瘤耐藥性的發生發展機制、以及腫瘤耐藥細胞—非耐藥細胞的相互作用機制，將對癌癥的診斷和治療均具有非常大的應用價值。

發明內容

有鑒于現有技術的上述缺陷，本發明所要解決的技術問題是如何更簡單高效地分析出耐藥性腫瘤細胞。

為實現上述目的，本發明提供了一種分析腫瘤細胞耐藥性的方法，包括將二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒應用于腫瘤細胞的步驟。

進一步地，包括以下步驟：

(a)提供一種二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒；

(b)將所述二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒與腫瘤細胞共孵培養；

(c)檢測腫瘤細胞對所述二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒的內吞性能。

進一步地，金屬有機框架納米顆粒包括ZIF-8納米顆粒，ZIF-70納米顆粒和ZIF-90納米顆粒等。

進一步地，在步驟(b)之前還包括步驟(d)，步驟(d)為對二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒進行熒光分子修飾。

進一步地，步驟(d)中熒光分子選自熒光素、羅丹明、菁染料、香豆素和熒光無機納米晶中的一種或多種。

進一步地，二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒與熒光分子按照質量比20-2000:1進行反應。

進一步地，步驟(b)中將二氧化硅納米顆粒、聚苯乙烯-co-聚丙烯酸納米顆粒或金屬有機框架納米顆粒與腫瘤細胞共孵培養0.5-4h。