[發(fā)明專利]基于OATP1B1和OATP1B3的何首烏中肝毒性化合物的快速篩選方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110654288.4
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號(hào): CN113380343A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬雙成;汪祺;文海若;李勇;楊建波;于建東;姚令文
• 申請（專利權(quán)）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號(hào): G16C20/64
• 分類號(hào): G16C20/64;G16C20/30;G16C20/90;G16C20/20;G16C20/50;G16C10/00;G16B15/30;G16B50/30
• 代理公司: 北京悅和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

本發(fā)明涉及一種基于計(jì)算機(jī)分子對接技術(shù)的何首烏中肝毒性化合物的篩選方法，其包括以下步驟：(1)獲得何首烏中至少一種待檢化合物的三維化學(xué)結(jié)構(gòu)；(2)構(gòu)建OATP1B1、OATP1B3的蛋白同源模建結(jié)構(gòu)，并分別確定OATP1B1和OATP1B3的活性位點(diǎn)；(3)將所述待檢化合物和作為OATP1B1和OATP1B3共同底物的陽性化合物分別與所述活性位點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算機(jī)分子對接，獲得對接打分；(4)所述待檢化合物判定為肝毒性化合物的條件是：所述待檢化合物的對接打分達(dá)到對接判定值。本發(fā)明的篩選方法快速、經(jīng)濟(jì)，操作簡單，而且可實(shí)現(xiàn)眾多化合物的高通量篩選。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種何首烏中肝毒性化合物的快速篩選方法，具體涉及基于分子對接技術(shù)的、以有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1(organic anion transporting polypepide 1B1，OATP1B1)和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B3(organic anion transporting polypepide 1B3，OATP1B3)為作用靶點(diǎn)的何首烏中肝毒性化合物的篩選方法。

背景技術(shù)

何首烏為蓼科植物何首烏(PolygonummultiflorumThunb.)的干燥塊根，具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)的功效，是歷代醫(yī)家廣為推崇的補(bǔ)益藥和抗衰老藥，其臨床應(yīng)用非常廣泛，但近年來有關(guān)何首烏其毒性問題逐漸凸顯，國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)不良反應(yīng)監(jiān)測中心近幾年收集到何首烏制劑(涉及1000多種)的不良反應(yīng)報(bào)告超過2萬份，肝功能損害是其主要的不良反應(yīng)。何首烏引發(fā)的藥物性肝損傷占全部藥物肝損害病例的1.06％(排名第15位)，占全部中藥肝損害病例5.69％(排名第1位)。

何首烏成分眾多，主要包括蒽醌類、二苯乙烯類、磷脂類、鞣質(zhì)類、酚類、甾醇類等化合物等，但其中的肝毒性成分不明確，通過化學(xué)成分分析方法并不能有效地表征何首烏的肝毒性。因此，需要明確其肝毒性物質(zhì)，指導(dǎo)臨床安全、合理用藥。

已經(jīng)報(bào)道的何首烏中肝毒性成分的篩選方法主要采用體外細(xì)胞或微組織實(shí)驗(yàn)、或者動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。楊敏等(何首烏肝毒性物質(zhì)基礎(chǔ)探索研究[J].中國中藥雜志,2016,41(7):1289-1296.DOI:10.4268/cjcmm20160721.)報(bào)道了運(yùn)用MTT法檢測何首烏中游離蒽醌、結(jié)合蒽醌及萘類共11個(gè)單體成分對Hep G2細(xì)胞的毒性，將有明確細(xì)胞毒的成分與大鼠肝切片共同培養(yǎng)后制備肝組織勻漿，通過BCA法測定勻漿液中蛋白含量對細(xì)胞毒成分進(jìn)行驗(yàn)證，以考察這些成分對肝組織的毒性作用。衛(wèi)培峰等(制首烏不同成分誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡與腫瘤壞死因子α的相關(guān)性研究，四川中醫(yī)，2009,27(10):47)報(bào)道了用制首烏、大黃酸、大黃素、大黃酚對大鼠灌胃給藥3個(gè)月，檢測出TNF-α與制首烏不同成分引發(fā)大鼠肝臟細(xì)胞凋亡有相關(guān)性。采用體外細(xì)胞、微組織實(shí)驗(yàn)的篩選方法存在肝毒性成分靶點(diǎn)不明確的問題，采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的篩選方法存在耗時(shí)長、費(fèi)用高等問題。因此，提供一種快速且準(zhǔn)確的用于篩選何首烏中肝毒性分子的方法是本領(lǐng)域亟待解決的問題。

有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽OATP1B1和OATP1B3屬于溶質(zhì)運(yùn)載體超家族，可介導(dǎo)藥物或內(nèi)源性物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，在肝臟高表達(dá)。由于藥物通過OATP1B1和OATP1B3攝取進(jìn)入肝臟后才能進(jìn)行代謝排泄，因此轉(zhuǎn)運(yùn)介導(dǎo)過程至關(guān)重要。OATP1B1和OATP1B3的底物眾多，這兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物發(fā)生底物重疊時(shí)可引發(fā)藥物相互作用，甚至是毒性反應(yīng)。

分子對接技術(shù)主要應(yīng)用于藥物分子設(shè)計(jì)領(lǐng)域，是基于計(jì)算機(jī)科學(xué)，通過受體的特征以及受體和藥物分子之間的相互作用方式來進(jìn)行藥物設(shè)計(jì)的方法。主要研究分子間(如配體和受體)相互作用,并預(yù)測其結(jié)合模式和親合力的一種理論模擬方法。同時(shí)，分子對接也可用于預(yù)測小分子之間的結(jié)合。通過對肽庫中多肽的結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬，預(yù)測其與對應(yīng)目標(biāo)分子結(jié)合的方法可以節(jié)省大量的在肽適體篩選過程中的人力物力消耗，避免篩選過程中的有毒試劑對實(shí)驗(yàn)人員的危害，極大的提高篩選效率和肽庫容量帶來的限制等問題。

發(fā)明內(nèi)容