[發明專利]一種皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體的制備方法

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• 申請號: 202110654166.5
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113388575A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 沈自慧;王雪
• 申請（專利權）人: 杭州露源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;A61K35/28;A61K9/10;A61P17/02
• 代理公司: 武漢菲翔知識產權代理有限公司 42284
• 代理人: 張紅

本發明公開了一種皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體制劑的制備方法，包括以下步驟：S1：將間充質干細胞接種到擴增培養基進行培養；S2：收集間充質干細胞培養基，離心去除細胞碎片，過濾去除大顆粒，得到間充質干細胞培養上清；S3：用切向流超濾膜濃縮間充質干細胞培養上清，得到外泌體濃縮液；S4：對外泌體濃縮液進行過柱處理，去除雜蛋白，得到外泌體懸液；S5：將所得外泌體懸液中加入透明質酸鈉制成間充質干細胞外泌體制劑。該皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體的制備方法，本發明優選人胚胎干細胞源間充質干細胞作為外泌體的來源，來源更穩定，功能更強大，能夠有效控制損傷皮膚真皮層的炎性浸潤。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體為一種皮膚抗衰老用胚胎干細胞外泌體的制備方法。

背景技術

外泌體是細胞分泌的納米級微小囊泡，直徑約為30-150nm，具有脂質雙層膜結構，作為一種活細胞分泌的亞細胞成分，外泌體廣泛參與細胞之間的交流，并可以作為干細胞的旁分泌因子來發揮生物學效應。外泌體包含豐富的蛋白質、RNA及DNA等生物活性物質。干細胞外泌體與干細胞具有相似的生物學性能，但更加安全穩定高效，具有更強而復雜的信號分子轉運和調控能力，為無細胞移植治療的情況下實現組織再生、組織修復提供了新策略、新方法。

皮膚是人體第一大器官，作為人體的保護屏障，具有防護外來機械損傷、防止病原微生物和化學性物質入侵機體的重要作用。皮膚損傷有外力導致的機械損傷和病理損傷，例如：日常生活中皮膚損傷，糖尿病患者并發癥導致的慢性難愈合病理損傷。研究表明，在皮膚損傷修復過程中抑制炎癥是促進皮膚損傷修復愈合的關鍵。炎癥是指先天免疫系統被激活，入侵的病原體攻擊皮膚組織產生的反應。

目前相關研究報道表明，在治療皮膚損傷修復中的外泌體，主要來源于臍帶、骨髓、脂肪間充質干細胞，在細胞培養過程中質量不易控制，而胚胎干細胞來源的間充質干細胞外泌體擁有更高的生物活性和批次一致性，質量穩定，更適合大規模生產。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體的制備方法，解決了上述背景技術中提出的問題。

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體制劑的制備方法，包括以下步驟：

S1：將間充質干細胞接種到擴增培養基進行培養；

S2：收集間充質干細胞培養基，離心去除細胞碎片，過濾去除大顆粒，得到間充質干細胞培養上清；

S3：用切向流超濾膜濃縮間充質干細胞培養上清，得到外泌體濃縮液；

S4：對外泌體濃縮液進行過柱處理，去除雜蛋白，得到外泌體懸液；

S5：將所得外泌體懸液中加入透明質酸鈉制成間充質干細胞外泌體制劑。

優選的，所述S1對間充質干細胞進行培養時，采用無血清培養基。

優選的，所述S2步驟中在細胞培養上清濃縮過程中，先后使用0.45μm 和0.22μm濾膜過濾，得到濃縮液。

優選的，所述S3步驟中超濾膜截留物質分子量大于5KD，上清液濃縮倍數為20倍。

優選的，所述S4步驟中使用的外泌體分離柱為35nm+色譜柱，能過濾35 nm以下的雜蛋白。

優選的，所述S5步驟中透明質酸鈉的濃度為1％-5％。

本發明提供了一種皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體的制備方法，具備以下優點：

1、該皮膚損傷修復用間充質干細胞外泌體制劑的制備方法，本發明優選人胚胎干細胞源間充質干細胞作為外泌體的來源，相比成體組織干細胞外泌體來源更穩定，功能更強大，能夠顯著促進皮膚損傷修復；