[發(fā)明專利]檢測(cè)新型冠狀病毒的引物探針組合物、試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110653924.1
• 申請(qǐng)日: 2021-06-11
• 公開（公告）號(hào): CN115466799A
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王愛萍;賈蕊;張改平;劉東民;劉紅亮;丁培陽(yáng);馮華;王彥偉;田媛媛;馬紅芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南中澤生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

本發(fā)明涉及檢測(cè)新型冠狀病毒的引物探針組合物、試劑盒及方法。本發(fā)明基于雙重檢測(cè)靶標(biāo)，在同一檢測(cè)體系中分別針對(duì)新型冠狀病毒S基因和N基因?yàn)樵O(shè)計(jì)了檢測(cè)引物探針組合物，并提供了包含該引物探針組合物的新型冠狀病毒檢測(cè)試劑盒及非疾病診斷目的的檢測(cè)方法，具有敏度性高、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)、檢測(cè)速度快、結(jié)果客觀、高通量等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明提供的試劑盒和非疾病診斷目的的檢測(cè)方法不僅能夠?qū)崿F(xiàn)定性檢測(cè)，還能夠?qū)Υ龣z樣本的核酸濃度作出客觀的、定量的檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)樣品的病毒含量進(jìn)行準(zhǔn)確判定，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及檢測(cè)新型冠狀病毒的引物探針組合物、試劑盒及方法。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)屬于冠狀病毒科，β類冠狀病毒，是一種有包膜、基因組為線性非節(jié)段單股正鏈RNA病毒。病毒粒子呈球形，直徑為120-160nm，基因組全長(zhǎng)約30kb。目前已完成多株新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的全基因組序列測(cè)定，SARS-CoV-2與SARS 基因組相似性為80％左右。

人感染新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的一般癥狀是發(fā)熱、乏力、干咳，一些嚴(yán)重的臨床癥狀有急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒、出凝血功能障礙等。因此，SARS-CoV-2的快速、可靠檢測(cè)至關(guān)重要，SARS-CoV-2的快速檢測(cè)不僅是SARS-CoV-2 防控所必需的，也是與其臨床癥狀類似的SARS、MERS等呼吸系統(tǒng)疾病進(jìn)行鑒別診斷所必需的。

目前，對(duì)新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)檢測(cè)方法有聚合酶鏈反應(yīng)、恒溫?cái)U(kuò)增芯片法、膠體金法抗體檢測(cè)等。其中恒溫?cái)U(kuò)增芯片法、膠體金法抗體檢測(cè)的敏感性不高和特異性不強(qiáng)。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種快速檢測(cè)SARS-CoV-2的方法，特別適用于篩選質(zhì)量較差或降解的帶有不可恢復(fù)病毒的樣本。PCR技術(shù)使SARS-CoV-2的診斷能夠在收樣后數(shù)小時(shí)內(nèi)完成，縮短了診斷時(shí)間。PCR檢測(cè)新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的方法具有特異、敏感、快速的特點(diǎn)，但有費(fèi)時(shí)、易污染、擴(kuò)增后需電泳檢測(cè)和每次檢測(cè)的樣品數(shù)量少等特點(diǎn)。

目前的SARS-CoV-2核酸檢測(cè)試劑盒大多基于RT-qPCR檢測(cè)技術(shù)，其檢測(cè)引物探針均是針對(duì)單一靶基因設(shè)計(jì)。但是，病毒單堿基突變的頻率約為10^-6，核酸序列變異程度高，易產(chǎn)生由于突變導(dǎo)致的假陰性檢測(cè)結(jié)果。目前檢測(cè)技術(shù)存在靈敏度低的問題，因此需要提高靈敏度消除假陰性結(jié)果。因此，亟需研發(fā)新的、高效準(zhǔn)確的檢測(cè)新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)方法，以用于檢測(cè)疑似病例及待確診病例中SARS-CoV-2的核酸。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供用于檢測(cè)新型冠狀病毒的引物探針組合物，以解決現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)可靠性和靈敏度差的技術(shù)問題。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供包含上述引物探針組合物的新型冠狀病毒定性檢測(cè)試劑盒。

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供包含上述引物探針組合物的新型冠狀病毒定量檢測(cè)試劑盒。

本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供非診斷目的的新型冠狀病毒定性檢測(cè)方法。

本發(fā)明的第五個(gè)目的在于提供非診斷目的的新型冠狀病毒定量檢測(cè)方法。

本研究旨在建立一種更靈敏、更可靠、成本更低、速度更快的單步多重逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)方法，利用刺突蛋白(S)基因和核蛋白(N)基因中的高變區(qū)，這些引物用于區(qū)分 SARS-CoV-2病毒與流感病毒和其他冠狀病毒，設(shè)計(jì)用于熒光探針封閉管檢測(cè)的引物。探針的合并可以識(shí)別PCR產(chǎn)物的特異性，并允許自動(dòng)讀取反應(yīng)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：