[發明專利]一種檢測血清中5-羥色胺和褪黑素濃度的方法

有效

• 申請號: 202110651840.4
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113607829B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 成曉亮;尚紅;韓曉旭;戴錦娜;李美娟;張偉
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤;王海云

本發明提供一種檢測血清中5?羥色胺和褪黑素濃度的方法，在血清樣品的預處理過程中采用碳酸鈉溶液作為pH調節劑，甲基叔丁基醚作為萃取液，可以增強5?羥色胺的萃取效率，并篩選出最佳的流動相、梯度和色譜柱等色譜條件，可以一次性對血清中5?羥色胺和褪黑素同時進行檢測，靈敏度高、特異性強、準確且前處理過程簡單，5.5分鐘之內完成血清中5?羥色胺和褪黑素的分離和檢測，準確度與精密度基本滿足要求，可用于臨床上血清中5?羥色胺和褪黑素的定量分析，為臨床上5?羥色胺和褪黑素濃度監測提供簡單快速的檢測方法。

技術領域

本發明屬于血液檢測技術領域，具體涉及一種檢測血清中5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine，5-HT)和褪黑素(Melatonin，MLT)濃度的方法。

背景技術

5-羥色胺和褪黑素作為人體內重要的吲哚胺類神經遞質，具有調節生物節律、情緒、認知、清除自由基、促進炎信號傳導等多種生物活性，同時還對骨代謝有著重要的影響。褪黑素是5-羥色胺的代謝產物，可經由5-羥色胺N-乙酰轉移酶和5-羥色胺N-乙酰甲氧基轉移酶轉化為褪黑素。近年來的國內外研究發現，5-羥色胺參與了骨形成和骨重吸收的過程，包括中樞5-羥色胺的促進成骨作用和外周5-羥色胺對骨形成的負性調節作用；而褪黑素同樣具有促進成骨細胞增殖和分化以及骨分化標記物表達作用，同時可以通過促進OPG分泌和消除破骨細胞自由基來抑制破骨細胞分化，5-羥色胺和褪黑素在維持骨代謝動態平衡中都扮演著至關重要的角色，為骨質疏松等骨代謝疾病提供了新的靶點和方向。利用超高效液相色譜串聯質譜技術同時檢測血清中5-羥色胺和褪黑素濃度，可以通過循環5-羥色胺和褪黑素水平來反應人體骨量和骨結構的變化，用于評估老年人、絕經后婦女、2型糖尿患者等人群的骨質酥松情況，為臨床診治提供科學依據。

北京洛奇臨床檢驗所股份有限公司于2016年申請的中國專利(申請號:201610220614.X)公開了一種“高效液相色譜串聯質譜技術檢測唾液中褪黑素的方法及試劑盒”，其提供了一種利用高效液相色譜串聯質譜法檢測唾液中褪黑素的方法，該方法檢測成分單一，基質簡單，而且如果是只檢測褪黑素，前處理條件非常簡單，萃取液毒性也很大，氮吹時間較長，不適用于血清樣品的前處理，即使采用該專利中的色譜條件和前處理方法也無法同時檢測5-羥色胺和褪黑素，對于血清中褪黑素的臨床檢測沒有太大參考價值。另一篇專利(申請號:201910058794.X)公開了“一種采用HPLC同時檢測醬油中多種生物胺含量的方法”，該專利里中待測物雖然含有5-羥色胺，但待測樣品不是生物樣品，基質簡單，而且前處理采用衍生法，非常復雜。

由于5-羥色胺和褪黑素分別屬于堿性和中性物質，一同檢測比較困難，目前關于血清中5-羥色胺和褪黑素的一同檢測尚未見報道，Chau?RM(Chau?RM,PatelBA.Determination?of?serotonin,melatonin?and?metabolites?in?gastrointestinaltissue?using?high-performance?liquid?chromatography?with?electrochemicaldetection.Biomed?Chromatogr.2009,23(2):175-81.)等人采用電化學分析技術一同檢測胃腸道中的5-羥色胺和褪黑素，靈敏度低(褪黑素的檢測限為70ng/ml)，不能滿足臨床血樣檢測需求，分析時間長(30min)，也不利于臨床應用。

發明內容

本發明的目的是在現有技術的基礎上，提供一種檢測血清中5-羥色胺和褪黑素濃度的方法。

本發明的技術方案如下：

一種檢測檢測血清中5-羥色胺和褪黑素濃度的方法，

其中，5-羥色胺和褪黑素對應的內標物分別為：5-羥色胺-d4(5-HT-d4)，褪黑素-d4(MLT-d4)；