[發明專利]桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立結合多成分含量測定在桑葉質量評價中的應用

有效

• 申請號: 202110651660.6
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113376284B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 杜巖;湯道權;仲巧巧;李丁香;張染
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤;王海云

本發明涉及一種桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立結合多成分含量的測定在桑葉質量評價中的應用，本發明在建立桑葉高效液相指紋圖譜時，采用70％甲醇水作為溶劑，選擇ZORBAX SB?C₁₈作為色譜柱，采用0.05～0.15％甲酸甲醇溶液?0.05～0.15％甲酸水溶液作為混合流動相進行梯度洗脫，建立的指紋圖譜可以實現對桑葉復雜成分的分離，能夠較為全面的反映桑葉的整體化學信息。采用本發明的方法建立的指紋圖譜共31個共有峰，并指認了6個特征峰，各色譜峰分離度較好，同時對6個特征峰進行定量測定，避免單一化學成份測定的缺陷，進一步實現對桑葉質量的全面評價。

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，具體涉及一種桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立結合多成分含量測定在桑葉質量評價中的應用。

背景技術

桑(Morus alba L.)，桑科桑屬植物，原產于中國中部和北部，在朝鮮、日本、蒙古、歐洲等地亦有栽培。白桑(Morus alba)、黑桑(M.nigra)和紅桑樹(M.rubra)是桑屬中最著名的三個物種。桑葉(Mulberry Leaf)是桑的干燥葉，初霜后采收，除去雜質，曬干而得。桑葉藥食兩用，味苦、甘，性寒，歸肺、肝經，始載于《神農本草經》，具有疏散風熱、清肺潤燥、清肝明目、涼血止血的功效。桑葉中包含黃酮、生物堿、三萜、甾醇、多糖、酚酸等多類化學成分，現代藥理學研究表明，桑葉具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗抑郁、抗炎、抗菌及抗腫瘤等功效。

中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學成分系統研究的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質量的真實性、優良性和穩定性，符合中藥“整體性”及“模糊性”的特點。以指紋圖譜作為中藥(天然藥物)提取物及其制劑的質量控制方法，已成為目前國際共識。桑葉產地豐富，各地種植環境及是否經霜采收均影響其品質。在2020版《中國藥典》中，桑葉的質量研究指標成分為蘆丁，而中藥具有成份多樣性及復雜性的特點，單一成分定量無法全面反應其整體質量，難以真正實現桑葉的質量控制，多組分定量質控策略已為廣大學者的共識。

指紋圖譜可反映中藥的整體性及模糊性，但忽略主要成分或有效指標成分的量變對藥材或成方制劑質量的影響；而多組分定量雖然在一定程度上可反映藥材或中藥成方制劑的主要有效成分的量變，但忽略了其整體作用的特點。指紋圖譜結合多組分定量可有效克服上述兩種方法中采用任何一種方法對中藥或其成方制劑的不足。桑葉在我國地緣分布較廣、采收季節及加工方法可能存在差異，影響桑葉的質量，因此，需要建立一種不同產地桑葉的高效液相指紋圖譜并結合多成份定量對其品質進行綜合評價，以達到對不同來源的桑葉藥材進行質量控制。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有的桑葉質量檢測方法無法從整體上全面評價不同來源的桑葉的質量的問題，提供一種桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，建立的指紋圖譜中共31個共有峰，并指認了6個特征峰，各色譜峰分離度較好，并且可以同時對6個特征峰進行多組分定量測定，避免單一化學成份測定的缺陷，實現對桑葉的質量的全面評價。

本發明的另一目的是將所提供的桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立結合多成分含量的測定在桑葉的質量檢測或質量控制中的應用，全面反映不同地域來源的桑葉品質，從而確保桑葉的安全性和有效性，為桑葉藥材的質量控制提供更加有效的檢測策略。

本發明的技術方案如下：

一種桑葉高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，它包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：選擇多個不同來源的桑葉，每一來源的桑葉按照相同的步驟制備對應的供試品溶液，具體步驟如下：取桑葉加水煎煮，凍干制成干浸膏粉；向得到的干浸膏粉中加入體積比為60～80％甲醇水溶液作為溶劑，超聲處理20～40min進行溶解，冷卻至室溫，補重，濾過，取續濾液作為供試品溶液；