[發明專利]一株大黃素甲醚高產菌株謝瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)BYST1

有效

• 申請號: 202110649166.6
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113388527B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 張應烙;張蜀香;吳菲;尹彩萍;李喆
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/26;A01N35/06;A01P3/00;C12R1/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種大黃素甲醚高產菌株，同時提供了上述菌株的獲得方式以及大黃素甲醚產量分析的方法，本發明所提供的大黃素甲醚高產菌株為Aspergillus chevalieriBYST1，保藏單位為中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC2021285，保藏日期為2021年3月26日。本發明提供了該菌株的獲得方式，以及大黃素甲醚的產量分析，主要包括以下幾個步驟：(1)菌株的分離純化；(2)發酵并分離鑒定主要成分大黃素甲醚；(3)液相定量大黃素甲醚的產量；(4)利用九種不同培養基搖瓶發酵，評估大黃素甲醚的產量差異。該菌株在液體PDB培養基中發酵，大黃素甲醚的產量為28mg/L,為目前報道最高。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，提供了一株大黃素甲醚高產菌株。

背景技術

大黃素甲醚，別名朱砂蓮乙素；非斯酮；1,8-二羥基-3-甲氧基-6-甲基蒽醌，為金黃色針狀結晶。大黃素甲醚不僅可抑制真菌的萌發生長，還可誘導作物產生抗逆保衛反應；對多數作物白粉病具有極好的防治作用，同時對霜霉病、灰霉病、炭疽病等也有較好的防效；大黃素甲醚對人畜毒性極低，對環境友好，特別適合于綠色和有機蔬菜生產的生物制劑。

目前，大黃素甲醚已經被我國自主開發為新型植物源殺菌劑，在病害防治方面作用巨大，市場經濟效益好，但此種方法，與綠色經濟理念背離，對植物需求量大，殘渣多，且產量普遍較低，微生物發酵法主要原料葡萄糖屬于可再生資源，成本較低，產品收率更高。

發明內容

本發明針對以上技術不足，提供了一株大黃素甲醚高產菌株，命名為Aspergilluschevalieri BYST1,保藏單位：中國典型培養物保藏中心(CCTCC)；保藏地址：中國武漢武漢大學；保藏日期：2021年3月26日；保藏號：CCTCC M 2021285。本菌株為黑翅土白蟻共生菌，通過搖瓶發酵生產大黃素甲醚的產量為28mg/L，對日后投入農藥生產具有重要意義。

昆蟲共生菌是一類特境微生物，是許多新的活性天然產物的來源。本發明是對一株分離自黑翅土白蟻的Aspergillus chevalieri BYST1菌株制備大黃素甲醚的方法，步驟如下：

(1)BYST1菌株發酵液的制備：菌株BYST1接種于ME(生麥芽20g，蔗糖20g，蛋白胨1g，1000mL水)液體培養基中，于28℃，180r/min條件下,搖床培養3d后所得種子液再接種至其他培養基中大量發酵7d后獲得發酵液。

(2)代謝物的分離純化：減壓濃縮Aspergillus chevalieri BYST1菌株發酵液經乙酸乙酯萃取后的有機層獲得粗浸膏。并用二氯甲烷，甲醇體積比為(100:0、100:1、100:2、100:4、 100:8)為流動相梯度洗脫，合并相同組分分析結果，得到四個組分Fr1-Fr4。將Fr1重新裝硅膠柱，再以石油醚:乙酸乙酯體系梯度，石油醚：乙酸乙酯為5:1(v/v)洗脫得到化合物 A1(320mg)。

(3)代謝物的鑒定：采用質譜(ESI-MS)和核磁共振方法(¹H-NMR、¹³C-NMR)對化合物A1進行結構鑒定,確定化合物為大黃素甲醚，其結構如下：

進一步的對發酵培養基進行篩選后，大黃素甲醚的產量可以達到28mg/L,為目前報道最高。

綜上所述本發明獲得一株大黃素甲醚高產菌株Aspergillus chevalieri BYST1，利用搖瓶實驗，大黃素甲醚的產量達28mg/L，為目前報道最高。鑒于大黃素甲醚具有優異的防治白粉病等植物致病菌的效果，本技術發明具有良好的應用價值，特別是具備開發成高產大黃素甲醚微生物底盤細胞的潛力。

附圖說明：

圖1為本發明實施例提供的菌株Aspergillus chevalieri BYST1發酵主要產物大黃素甲醚的化學結構式。