[發明專利]一種黃精多糖含量的測定方法

在審

• 申請號: 202110648708.8
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113484289A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 肖強;唐娟;梁思琪;潘婧杰;周秀梅
• 申請（專利權）人: 湖北民族大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/42;G01N1/38;G01N1/28;C08B37/00
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 劉潔

1.一種黃精多糖含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：新鮮的黃精塊莖先用自來水洗凈，再用純水清洗，然后切成薄片置于60℃烘箱烘焙10～14h，用粉碎機磨成300目粉末，裝袋置于30℃烘箱內；

S2：取S1獲取的黃精塊莖粉末用濾紙和紗布包裹緊致，放入索氏提取器的提取管內，向提取瓶內加入石油醚，于恒溫85℃下回流提取2～3h，充分脫脂，粉末風干，密封保存；

S3：將S2獲取的脫脂完成后的粉末放入索氏提取器的提取管內，向提取瓶內加入80％乙醇溶液，于95℃下回流提取4～5h，脫去醇溶性單糖后風干密封保存；

S4：將S3獲取的脫脂脫醇溶性單糖的粉末按料液比1:20加入蒸餾水后，向溶液中加入黃精塊莖粉末相同質量的纖維素酶，置于超聲波細胞粉碎機粉碎細胞后進行抽慮操作，并將濾渣按照本步驟進行多次抽濾操作，將多次濾液混合在一起并進行濃縮，濃縮后的溶液進行冷凍離心；

S5：將S4獲取的溶液按照體積比1:4的比例加入無水乙醇，4℃冰箱過夜，冷凍離心除去乙醇，風干得到粗多糖，按本步驟進行多次操作，將粗多糖混合在一起；

S6：取S5獲取的粗多糖按質量體積比為1:30加入熱水將粗多糖進行復溶，加入質量比為10:1的2.5％的木瓜蛋白酶，并于恒溫45℃的水浴鍋水浴2～3h，再放入沸水中水浴，加入三氯乙酸，混勻，再次進行冷凍離心，取其上清液，得到待測樣品溶液；

S7：利用表面活性劑與待測樣品溶液混合，增大熒光同步光掃描時的光散射強度，并確定實驗同步掃描散射波長范圍為200～800nm；

S8：在比色管中依次加入0.5mol/L～3mol/L的NaOH、0.5mol/L～4mol/L的表面活性劑，搖勻加入S6制得的待測樣品溶液，其中NaOH：表面活性劑：待測樣品溶液的體積比為1:2:2，然后加入超純水稀釋并搖勻混合，其中超純水：待測樣品溶液的體積比為1:5，稀釋混合后在室溫下反應20～40min，設置激發狹縫分別為5nm和2nm，在波長為200～800nm范圍的熒光分光光度計上進行同步掃描，獲得RLS光譜，并以不加黃精多糖溶液的為空白組得到I⁰RLS，最大共振散射波長處測定體系的散射光強度與空白散射光強度，計算△IRLS＝IRLS-I⁰RLS，根據△IRLS得到多糖的含量，其中：多糖含量(％)＝(被測樣品中的多糖含量/總提取液的多糖含量)×100％；

S9：根據S8測定多糖含量測定方法，以質量濃度為橫坐標，共振光強度為縱坐標制作標準曲線，繪制多糖含量的標準曲線圖；

S10：再現性試驗，按照上述步驟對同一批次黃精多糖含量進行重復測定。

2.根據權利要求1所述的一種黃精多糖含量的測定方法，其特征在于：在S4中，超聲波細胞粉碎機的功率為240W，混合溶液置于超聲波細胞粉碎機內的時間為30min；濃縮混合溶液采用旋轉蒸發儀；溶液冷凍離心采用冷凍高速離心機冷凍離心，冷凍離心的溫度為4℃、轉速為10000r/min、時間為20min。

3.根據權利要求1所述的一種黃精多糖含量的測定方法，其特征在于：在S5中，溶液冷凍離心采用冷凍高速離心機冷凍離心，冷凍離心的轉速為4000r/min、時間為20min。

4.根據權利要求1所述的一種黃精多糖含量的測定方法，其特征在于：在S6中，使用超聲對粗多糖進行復溶，復溶的時間為10min；利用酶輔助三氯乙酸(TCA)沉淀法除去濾液中的蛋白質；濃縮混合溶液采用旋轉蒸發儀；溶液冷凍離心采用冷凍高速離心機冷凍離心，冷凍離心的溫度為4℃、轉速為10000r/min、時間為20min。

5.根據權利要求1所述的一種黃精多糖含量的測定方法，其特征在于：在S7中，表面活性劑為氯化十六烷基吡啶(CPC)。