[發(fā)明專利]一種基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的新型冠狀病毒雙靶標快速檢測方法及試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110648148.6 | 申請日： | 2021-06-10 |
| 公開（公告）號： | CN113373264B | 公開（公告）日： | 2022-04-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 杜憶南;邢晨;柳燕;周靜;祝亞亭;王小鳳;李倩;張智康 | 申請（專利權）人： | 安徽醫(yī)科大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王華 |
| 地址： | 230000*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 crispr cas 系統(tǒng) 新型 冠狀病毒 靶標 快速 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.一種基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的新型冠狀病毒雙靶標快速檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括：
兩組RT-RAA擴增引物：
Cas13-S-for：5’-GAAATTAATACGACTCACTATAGGGgctatcatcttatgtccttccctcagtcag-3’；
Cas13-S-rev：5’-aatggcaggagcagttgtgaagttcttttc-3’；
Cas12-N-for： 5’-aatgtcgcgcattggcatggaagtcaca-3’；
Cas12-N-rev：5’-gacttgatctttgaaatttggatctttg-3’；
兩種CRISPR特異性檢測的crRNA：
Cas12a-N-crRNA：
5’-uaauuucuacuaaguguagauauggcaccuguguaggucaa-3’；
Cas13a-S-crRNA：
5’-gauuuagacuaccccaaaaacgaaggggacuaaaacCAUAAGUCACAUGCAAGAAGACUACACC-3’；
RNA熒光探針：5’-FAM-mArArUrGrGrCmAmArArUrGrGrCmA-BHQ1-3’；
其中，m代表2位氧甲基修飾，r代表核糖核苷酸；
DNA熒光探針：5’ -VIC-TTATTATT-BHQ1-3’。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的新型冠狀病毒雙靶標快速檢測的試劑盒，其特征在于：還包括buffer A溶液和BufferB溶液；buffer A溶液配置方法為：向1L水中加入50mmol的Tris緩沖液，100nmol的醋酸鉀，20g的聚乙二醇粉末和2mmol二硫蘇糖醇；BufferB溶液為濃度為280mM的醋酸鎂溶液。
3.根據(jù)權利要求1所述的基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的新型冠狀病毒雙靶標快速檢測的試劑盒，其特征在于：還包括： HEPES緩沖液、MgCl2溶液、10×NEB buffer2.1緩沖液、RNaseinhibitor、T7 RNA polymerase、無RNA酶水。
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