[發明專利]玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子及其應用

有效

• 申請號: 202110648032.2
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113373147B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 代明球;何能;向艷麗
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超;樊戎

1.一種玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一種用于獲得權利要求1所述玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子的引物對，其特征在于：所述引物對為：

正向引物P1：5’-TTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’；

反向引物P2：5’-GCTCACGGTTGCCTTG-3’。

3.一種權利要求1所述玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子的獲得方法，其特征在于：以具有玉米干旱特異表達基因ZmRD101的玉米基因組DNA為模板，采用以下引物對：

正向引物P1：5’-TTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’；

反向引物P2：5’-GCTCACGGTTGCCTTG-3’；

進行PCR擴增，其所獲得的玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子序列為SEQ IDNO.1所示。

4.根據權利要求3所述的獲得方法，其特征在于：所述PCR擴增的反應體系：

所述PCR反應條件：95℃預變性3min；95℃變性30sec；60℃退火30sec；72℃延伸75sec；循環35次后；72℃延伸5min。

5.一種重組表達載體，其特征在于：它為含有權利要求1所述玉米干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子的植物表達載體。

6.根據權利要求5所述重組表達載體，其特征在于：所述植物表達載體為pZZ01523。

7.一種權利要求5所述重組表達載體的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）以玉米B73自交系干旱誘導表達基因ZmRD101啟動子序列為模板設計引物對，如下：

RD101-F：5’-CCTGTCAAACACTGATAGTTTTTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’，

RD101-R：5’-CCGGGATACTAGTGCGTTTAAACGCTCACGGTTGCCTTG-3’；

2）以玉米干旱誘導表達基因ZmRD101序列為模板進行PCR，得到基因PCR產物；其中，PCR擴增條件如下：

反應體系：

2x phanta Buffer	10ul
dNTP	0.4ul
正向引物P1	0.8ul
反向引物P2	0.8ul
Phanta max	0.4ul
cDNA	1.5ul
2O]]>	6.9ul

所述PCR反應條件：95℃預變性3min；95℃變性30sec；60℃退火30sec；72℃延伸75sec；循環35次后；72℃延伸5min；

3）線性化載體制備：使用限制性內切酶PMEI單酶切pZZ01523載體，使環狀載體線性化；

4）將載體線性化與酶切的基因PCR產物進行同源重組，得到重組產物；

5）重組產物轉化：重組產物轉化DH5α感受態細胞，檢驗得到重組表達載體。

8.一種下述各項之一在啟動目的基因表達和培育植物新品種中的應用，

1）權利要求1所述的啟動子；

2）權利要求5所述的重組表達載體。