[發明專利]一套具有包容性且精準鑒別并挖掘稻瘟病Pik抗病等位基因家族的技術體系及應用和分子標記

有效

• 申請號: 202110644560.0
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113744800B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 潘慶華;柴瑞鵬;陳心儀;華麗霞;王玲
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G16B20/20
• 分類號: G16B20/20;G16B30/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一套具有包容性且精準鑒別并挖掘稻瘟病Pik抗病等位基因家族的技術體系，其特征在于，該技術體系由“單元型-亞單元型-等位基因”三級檢測標記組成并逐級推進；供試品種是否攜帶目標基因由該技術體系檢測的統合結果而決定；

具體地，所述技術體系包含：

(1)該基因家族之功能性單元型/非功能性單元型的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定單元型分化清晰的基因組區域；設計2組單元型特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種的單元型分析而確認其可靠性；只有同時被判斷為K1及K2基因型的品種方為功能性單元型品種；在后續的檢測中，非功能性品種可被排除；

(2)該基因家族之K1/K2功能性單元型之亞單元型KM1/KM2、KH1/KH2、KM1/KH2、KH1/KM2的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定亞單元型特異性的單核苷酸多態性位點SNP；設計1組亞單元型特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種的亞單元型分析而確認其可靠性；

(3)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KM1/KM2亞單元型之廣譜持久抗性基因Pik的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KM1/KM2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik；

(4)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KM1/KM2亞單元型之廣譜持久抗性基因Pik-m的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-m基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KM1/KM2亞單元型，而且功能特異性分子標記為與Pik-m參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-m；

(5)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KM1/KM2亞單元型之抗性基因Pik-s的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-s基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KM1/KM2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik-s參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-s；

(6)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KM1/KM2亞單元型之廣譜持久抗性基因Pi1的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pi1基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KM1/KM2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pi1參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pi1；

(7)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KM1/KH2混合亞單元型之新型抗性基因Pik-IR8的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-IR8基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KM1/KH2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik-IR8參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-IR8；

(8)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KH1/KH2亞單元型之廣譜持久抗性基因Pik-p＝Pi7的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-p基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KH1/KH2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik-p參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-p；

(9)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KH1/KH2亞單元型之廣譜持久抗性基因Pik-h的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-h基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KH1/KH2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik-h參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-h；

(10)該基因家族之K1/K2功能性單元型之KH1/KH2亞單元型之新型抗性基因Pik-IR64的檢測程序：

通過族內等位基因的序列比較而界定目標基因特異性的SNP；分別設計其特異性分子標記并進行基于PCR技術的已知抗病基因參考品種目標基因的特異性基因型分析而確認其可靠性；Pik-IR64基因攜帶者應該屬于Pik基因家族之K1/K2功能性單元型，KH1/KH2亞單元型，而且2個功能特異性分子標記皆為與Pik-IR64參考品種相同基因型的品種；反之，任一檢測標記不符合本技術體系的檢測結果都不是目標基因Pik-IR64。