[發明專利]一種與豬肉肉色相關的分子標記、檢測方法、檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202110644320.0
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113186305B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 徐學文;徐祥華;劉瑩;劉炎;李新云;趙書紅
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 湖北創融藍圖知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42276
• 代理人: 羊淑梅

本發明屬于生物體的檢測與識別技術領域，尤其涉及一種與豬肉肉色相關的分子標記、檢測方法、檢測試劑盒及應用。本發明根據構建NUDT7基因啟動子置換雙熒光素酶報告載體確定影響豬肉肉色的致因突變，在啟動子上的突變位點設計特異性引物并進行擴增，利用限制性內切酶NheI對該位點進行多態性檢測，根據多態性檢測的結果來區分豬個體間肉色差異。

技術領域

本發明屬于生物體的檢測與識別技術領域，尤其涉及一種與豬肉肉色相關的分子標記、檢測方法、檢測試劑盒及應用。

背景技術

中國是世界上最大的生豬飼養與豬肉消費國。隨著物質生活水平的提高，人們對豬肉的追求逐漸從“吃得飽”過度到“吃得好”。豬肉顏色是影響消費者選擇的重要指標，是影響消費者購買力比較直觀的因素之一，但是調控豬肉肉色的候選基因及其分子標記鮮見報道。因此，對于肉色的遺傳改良逐漸成為優質種豬育種工作的重要研究方向。

肉色與畜禽的品種、年齡和性別、肌紅蛋白含量及表現形式、血紅素含量等很多因素有關。遺傳因素是改變肉質的重要因素，通過標準的選擇方法很難從基因上改善肉質包括肉色，但如果能夠確定和定位與肉質相關的基因，就加大了實現的可能。通過數量性狀基因座(QTL)定位研究肉質性狀是當前比較流行的研究。已有報道證明，少數主效基因和數量性狀核苷酸(QTN)會影響肉的顏色，包括酸肉基因PRKAG3和RYR1基因等。NUDT7(Nudix水解酶7)是一種蛋白質編碼基因，M.Taniguchi等人研究表明，上調豬NUDT7基因的表達量可以降低琥珀酰輔酶A的含量，從而導致骨骼肌中血紅素生物合成的下調，這可能部分解釋了家畜品種間肉色的差異。同年，該作者另一項研究表明日本野豬和大白豬的肉色差異部分是由該候選基因的差異表達引起的。其中，利用日本野豬和大白豬的基因組DNA對豬的NUDT7基因的全序列進行比較，共鑒定出116個遺傳多態性，包括113個SNP和3個indels。在該基因的5’啟動子區域，4個轉錄因子識別位點上鑒定出3個SNP，包括c-Ets-1(–7998TC),CdxA(–4187GA),MZF1(–3064AG),and Nkx-2(–3064AG)。在大白豬中檢測到的序列與轉錄因子識別的序列相同，而日本野豬的基因型與之不匹配。

由此可見，NUDT7是影響豬肉肉色變異的重要功能候選基因，但是時至今日，仍未見有關該基因功能性突變位點被鑒定的研究報道。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種與豬肉肉色相關的分子標記、檢測方法、檢測試劑盒及應用，目的在于解決現有技術中的一部分問題或至少緩解現有技術中的一部分問題。

本發明建立一種能夠在較短時間內判斷豬肉肉色的方法，并輔助育種。本發明是這樣實現的，一種與豬肉肉色相關的分子標記，其特征在于：所述分子標記為rs324204832，TC多態性位點。

本發明還提供了一種用于檢測如上述的分子標記的引物對，其特征在于：所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO：4-5所示。

本發明還提供了一種檢測豬肉肉色的試劑盒，包括根據上述的多態性位點確定樣品基因型的試劑。

進一步地，包括如上述的引物對。

本發明還提供了一種豬肉肉色檢測方法，利用上述的引物對對豬基因組DNA進行PCR擴增，擴增產物用NheI限制性內切酶酶切，若酶切產物有三條帶，即產物長度分別為416bp，318bp和98bp，則該個體的基因型為AB型；若個體的酶切產物有一條帶，即產物長度為416bp，則該個體的基因型為BB純合型；若個體的酶切產物有兩條帶，即產物長度分別為318bp和98bp，則該個體的基因型為AA純合型；BB型個體具有較低的肉色值。

進一步地，利用凝膠電泳檢測擴增產物的片段長度。

本發明還提供了如上述的分子標記、或引物對、或試劑盒、或檢測方法在豬肉質性狀相關分子標記輔助育種中的應用。