[發(fā)明專利]一種肝細胞三維培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110644304.1
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113151154A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 王晶波;陳晨;馬妍;沈葹;秦文;楊倬;王麗媛;霍軍生;卓勤;宮照龍
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與健康所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京市合德專利事務所 11244
• 代理人: 王文會;劉榜美

1.一種肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，它包括如下步驟：

步驟一，細胞培養(yǎng)：將肝細胞放入含培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放入37℃含體積含量為5％CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當培養(yǎng)皿中的細胞密度達到80-90％時進行傳代，得到用于三維細胞培養(yǎng)的細胞懸浮液；

步驟二，三維細胞培養(yǎng)準備：將步驟一中得到的細胞懸浮液和稀釋水凝膠添加至孔板培養(yǎng)皿中進行混合，并調節(jié)細胞終濃度為1×10⁵/ml-5×10⁵/ml，在室溫下靜置至凝固，得到細胞水凝膠混合物，其中稀釋水凝膠中水凝膠與水凝膠稀釋液按體積比為1:2-1:4；

步驟三，三維細胞培養(yǎng)，向步驟二中的孔板培養(yǎng)皿添加細胞培養(yǎng)液后，放置的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天半量更換細胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)一段時間后得到三維細胞培養(yǎng)產物。

2.根據(jù)權利要求1所述的肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟二中細胞濃度為1.1×10⁵/ml。

3.根據(jù)權利要求1所述的肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟二中水凝膠與水凝膠稀釋液體積比為1：3.7。

4.根據(jù)權利要求1所述的肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟三中培養(yǎng)時間為9.5天。

5.根據(jù)權利要求1所述的肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟一中培養(yǎng)液為體積百分含量10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液。

6.根據(jù)權利要求1-5所述的肝細胞三維培養(yǎng)方法，其特征在于，還包括步驟二(1)預測步驟，所述步驟二(1)設置在步驟二與步驟三之間，其包括：根據(jù)如下預測模型以需要的細胞活性OD值確定細胞濃度、培養(yǎng)時間和水凝膠與水凝膠稀釋液體積比：

Y＝2.11-3.625×10^-3A+0.26B-0.014C-0.075AB-0.047AC+0.050BC-0.042A²-0.36B²-0.037C²，其中：A為細胞濃度，B為培養(yǎng)時間，C為水凝膠與水凝膠稀釋液體積比，Y為細胞活性OD值。