[發(fā)明專利]一種外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體的構(gòu)建方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110640037.0
• 申請(qǐng)日: 2021-06-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113304119A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳文慧;盧迅;胡枚潔;鄭杰峰;葉熠愷;徐彩彩;周麗萍;葉海偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 臺(tái)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K9/50
• 分類號(hào): A61K9/50;A61K31/44;A61K47/46;A61K9/127;A61P35/00
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本發(fā)明提供了一種外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟：(1)將索拉非尼和磷脂加入有機(jī)溶劑中，溶解混勻，得到索拉非尼磷脂復(fù)合物，再加入乳化劑、聚合物膠束劑，作為油相；(2)將外泌體溶于磷酸鹽緩沖液中，作為水相，將水相加入到步驟(1)制得的油相中，形成水/油穩(wěn)定初乳；(3)將水/油穩(wěn)定乳液后處理得到外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體。通過(guò)本方法制備得到的外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體，具有分散性良好、包封率高、載藥高、腫瘤靶向性和治療效果好、安全性好的特征。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及索拉非尼藥用載體，更具體地，涉及一種外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌腫瘤是目前臨床上最普遍的一種惡性腫瘤，根據(jù)臨床研究結(jié)果表明，原發(fā)性肝癌中90％以上為肝細(xì)胞癌(HCC)，而在亞洲的肝細(xì)胞癌發(fā)病率和致死率都較高，嚴(yán)重影響到人們的生命健康。現(xiàn)在，外科手術(shù)治療HCC是最有效的一種方式，然而，早期診斷HCC手術(shù)難度大，切除率低，而且癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移對(duì)治療有嚴(yán)重影響HCC。大部分(85％)HCC我國(guó)患者在確診時(shí)已錯(cuò)過(guò)最佳手術(shù)期。中國(guó)無(wú)論是癌癥發(fā)生數(shù)還是死亡數(shù)均高居世界首位。

索拉非尼(SOR)是一種靶向的小分子服用抗癌藥物，是首個(gè)被FDA批準(zhǔn)用于治療HCC的靶點(diǎn)抗腫瘤藥物。它通過(guò)抑制絲氨酸-蘇氨酸激酶、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體和血小板源性生長(zhǎng)因子受體來(lái)抑制腫瘤血管生成，并通過(guò)阻止信號(hào)傳導(dǎo)路徑抑制腫瘤細(xì)胞增殖，從而起到雙重抑制和多靶點(diǎn)阻止抗腫瘤的作用。

盡管SOR治療肝癌有一定作用，但SOR對(duì)酪氨酸激酶作用抑制了腫瘤的血管形成，導(dǎo)致了不良的治療效果。SOR作為小分子藥物療效較好，納米脂質(zhì)體具有良好的腫瘤靶向性，兩者結(jié)合可提高治療效率和增加藥物的穩(wěn)定性。然而目前市場(chǎng)上的SOR劑型毒副作用大，體內(nèi)新陳代謝較快，半衰期短，體內(nèi)藥物含量峰值效應(yīng)明顯，嚴(yán)重影響治療療效，SOR缺乏進(jìn)入體內(nèi)病灶部位選擇性，故需要大劑量頻繁給藥，可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重耐藥性。

近年來(lái)，外泌體(small ExtracellularVesicles,Exo)作為天然的細(xì)胞間信息傳遞載體，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，也已經(jīng)被用于腫瘤無(wú)創(chuàng)診斷、靶向藥物遞送、腫瘤疫苗、膜蛋白遞呈、免疫檢查點(diǎn)治療等領(lǐng)域。近年來(lái)，外泌體以“天然納米粒子”作為藥物的載體使用，已成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，向外泌體中載入相關(guān)的microRNA、siRNA，抗腫瘤藥物等均表現(xiàn)出高效的靶向性及藥物傳遞功能，為治療各種疾病提供了有效的手段。有研究證實(shí)，在異種腫瘤移植的裸鼠肺癌模型中，以外泌體作為紫杉醇的藥物載體進(jìn)行干預(yù)，既明顯抑制了腫瘤的生長(zhǎng)，又顯著降低了藥物本身的毒性。通過(guò)基因工程使小鼠未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體表達(dá)一種特異性外泌體膜蛋白(Lamp2b)，使其與av整合素特異性IRGD肽融合或?qū)⑵淙诤系缴窠?jīng)元特異性RVG肽上，均表現(xiàn)出高效的靶向性及藥物傳遞。間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體表面有特殊的分子，可避免與抗體、凝血因子等產(chǎn)生作用，避免體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，提高藥物的安全性；4)由于外泌體具有遞送生物分子的功能，可以與細(xì)胞膜融合，直接將藥物輸送到細(xì)胞質(zhì)，通過(guò)逃避吞噬溶酶體，顯著提高弱勢(shì)分子傳遞的效率。此外，外泌體作為一種亞細(xì)胞成分的膜結(jié)構(gòu)載體，與其它納米載體相比，體積較小、易保存、高度穩(wěn)定，具有極高的生物相容性和體內(nèi)安全性；不易被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)清除；極大地減少了非靶向的肝臟富集，從而可減少對(duì)肝臟的毒性及實(shí)現(xiàn)裝載藥物的有效利用。

基于上述背景，構(gòu)建了一種全新的藥物輸送系統(tǒng)，提高局部藥物濃度，使藥物在局部緩慢釋放，延長(zhǎng)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用時(shí)間，同時(shí)增加藥物的靶向作用和藥物在腫瘤細(xì)胞的蓄積，提高腫瘤治療的效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高局部藥物濃度、延長(zhǎng)藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用時(shí)間、增強(qiáng)藥物靶向作用、提高治療腫瘤效果的藥物輸送系統(tǒng)的構(gòu)建方法。

本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

首先，本發(fā)明提供一種外泌體聯(lián)合索拉非尼脂質(zhì)體的構(gòu)建方法，包括以下步驟：