[發明專利]一種降解氯酚菌群的原位篩選及復合菌劑制備方法

在審

• 申請號: 202110638066.3
• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113308428A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 王玲;張海芹;李小平
• 申請（專利權）人: 蘇州天瑞環境科技有限公司
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/02;C12N1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種降解氯酚菌群的原位篩選，其特征在于，包括以下步驟：

原料篩選：選取帶有厭氧顆粒的污泥，并在真空中攪拌，之后擠壓成直徑在5-6mm范圍內的原料顆粒；

原料培養：在篩選后的原料顆粒外部均勻涂抹培養基，并使用熱風機對原料顆粒加熱，待培養基將原料顆粒包裹起來，得到厭氧原料；

原料馴化：對厭氧原料放入到厭氧反應器中進行馴化，馴化后采用稀釋倍數法在培養基上進行培養；

細菌提取：對馴化后的細菌進行分離和鈍化得到試劑，之后再向試劑中添加氯酚，得到初篩菌液；

細菌復篩：將得到的菌液接種到固體培養基中涂布培養，待長出菌體后，用滅菌針挑出菌落接種到液體培養基中，待液體培養基中長出菌株后，搖勻菌液，直到從細胞形態鑒定確認為單一菌體為止；

菌劑：將通過上述步驟制得各種厭氧菌混合，并放入氯酚溶液中浸泡，得到菌劑。

2.根據權利要求1所述的一種降解氯酚菌群的原位篩選，其特征在于：原料篩選時，將污泥與瓊脂倒入真空攪拌機中攪拌，攪拌后倒入制粒機制成原料顆粒。

3.根據權利要求1所述的一種降解氯酚菌群的原位篩選，其特征在于：在原料顆粒表面涂抹培養基時包括以下步驟：

初步涂抹：先涂抹直徑在1-2mm范圍內的瓊脂顆粒，再使用熱風機以50-58℃的溫度對瓊脂顆粒的外部加熱，加熱2-3min后，得到第一層密封層；

二次涂抹：在第一層密封層的外部涂抹直徑在0.5-1mm范圍內的瓊脂顆粒，再使用熱風機以65-75℃的溫度對瓊脂顆粒的外部加熱，加熱4-6min后，得到第二層密封層；

三次涂抹：在第一層密封層的外部涂抹直徑在0.1-0.2mm范圍內的瓊脂顆粒，再使用熱風機以76-80℃的溫度對瓊脂顆粒的外部加熱，加熱4-6min后，得到第三層密封層。

4.根據權利要求1所述的一種降解氯酚菌群的原位篩選，其特征在于：原料培養中，培養基包括以下組分：酵母浸汁50-56份、蛋白陳12-18份、瓊脂40-45份、麥芽糖20-40份、胰蛋白陳5-8份、營養肉湯4-5份。

5.根據權利要求1所述的一種降解氯酚菌群的原位篩選，其特征在于：細菌復篩過程中，待長出菌株后，將菌液接種到固體培養基進行形態鑒定，或進行顯微鏡觀察和鑒定細胞形態是否相同來判斷分離純化是否成功，如果菌體不純，繼續采用固體-液體培養基交替培養方法進行分離和純化。

6.一種復合菌劑的制備方法，其特征在于，包括降解氯酚菌群的原位篩選，該復合菌劑的制備方法包括以下步驟：

初步混合：將不同厭氧菌菌劑放入都不同的試管中，并分別向菌劑中滴加氯酚溶液，并在40-45℃溫度下保存5-8min；

滴加混合：選擇其中一種菌劑，將其滴加其他菌劑中，并靜置，同理再選取一種菌劑滴加都其他菌劑中，最終將所有菌劑混合，得到混合菌劑。

7.根據權利要求6所述的復合菌劑的制備方法，其特征在于：初步混合時，氯酚溶液與菌劑的比例為1:28，同時滴加前，將氯酚溶液加熱到30-38℃。

8.根據權利要求6所述的復合菌劑的制備方法，其特征在于：滴加混合時，每次滴加之間的間隔為80-100min，同時滴加前，加入與菌劑1：1的清水，當靜置后沉淀物增加時，將該試劑倒掉。