[發明專利]一種犬瘟熱病毒納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110634593.7
• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113087792B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 張廣華;劉云;陸陽;區文彩;阮月敏
• 申請（專利權）人: 西寶生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N7/01;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 上海三方專利事務所(普通合伙) 31127
• 代理人: 吳瑋

本發明涉及生物技術領域，具體來說涉及一種犬瘟熱病毒納米抗體及其應用，所述犬瘟熱病毒納米抗體所述納米抗體能與犬瘟熱病毒N蛋白結合；且骨架區含有如SEQ ID NO.1所示的共同特征氨基酸序列。本發明提供一種可用于檢測犬瘟熱病毒的納米抗體，所述的抗體與犬瘟熱病毒具有良好的親和性，可以極其快速地檢測出血液中犬瘟熱病毒或其N蛋白，同時能夠使得犬瘟熱病毒檢測用的配對抗體的制備變得容易，所制備的試劑盒成本更低，且更易于儲藏和運輸；本發明的試劑盒可以靈敏檢測犬瘟熱病毒抗原，重復性好，結果穩定，方便快捷，納米抗體生產成本低且易于獲得。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體來說涉及一種犬瘟熱病毒納米抗體及其應用。

背景技術

自比利時布魯塞爾自由大學的免疫學家Hamers Casterman從駱駝血液中分離出的天然缺失輕鏈，僅含兩條重鏈，相比傳統抗體在結構上簡單許多的天然抗體后，基于一個重鏈可變區組成的單域抗體(VHH)，因其晶體結構直徑為2.5nm、長4nm,納米抗體概念得以提出。納米抗體一經發現，它所具有的一些獨特特征便引起研究者們的注意。作為一種小分子抗體，納米抗體有很多的優點。包括：1、分子小，結構穩定，耐熱性好。研究證實，將納米抗體在37℃放置一周或在高溫條件(90℃)下保存，都能保持比較好的生物活性。另外，納米抗體在強變性劑的條件下表現出不易變性或者變性后易復性的特點，研究表明納米抗體比常規抗體更容易儲藏和運輸，作為診斷試劑更具有優勢。2、親和力較高。雖然納米抗體缺少VL，但是VHH自身的一些性質使得納米抗體仍然保持了較高的親和力。研究發現從免疫的單域VHH抗體庫中分離出來的VHH單體具有nmol/L級的親和力，并且特異性好；3、對人體的免疫原性弱。目前已有的抗體大都是鼠源的，作用于人體會產生人抗鼠抗體的免疫反應。Revets等將其制備的納米抗體反復注射小鼠后未見有針對這種單域VHH抗體的抗體產生。所以納米抗體的免疫原性較弱，與人的生物相容性較好，可能是由于駱駝VHH基因與人VH3家族序列高度同源的原因；4、易表達、易純化。由于納米抗體單獨能夠形成完整的獨立結合抗原的結構域，很容易實現可溶性表達，從而使得納米抗體的生產比一般抗體的生產更加容易，作為診斷試劑的制備也更快、更便宜。

另一方面，犬瘟熱(Canine distemper，CD)是由CD病毒(CDV)引起食肉目中多種動物的一種急性、高度接觸性傳染病，發病死亡率高達90％以上。雖然近20年在易感動物中廣泛接種CDV疫苗，但隨著CDV不斷變異，大量有關CDV弱毒疫苗免疫犬爆發CD疫情或發病的報道 ，目前仍是危害犬、毛皮經濟動物及野生動物的重大疫病之一。CDV屬于副粘病毒科麻疹病毒屬，為有囊膜的不分節段的負鏈RNA病毒，只有一個血清型。病毒顆粒主要由核衣殼蛋白(N)、血凝蛋白(H)、融合蛋白(F)、基質膜蛋白(M)、大蛋白(L)和磷蛋白(P)組成。該病毒具有廣泛的組織細胞嗜性，可感染多種細胞組織，其中親嗜最強的是淋巴細胞和上皮細胞，嚴重破壞機體的細胞免疫和體液免疫，導致免疫抑制，引起其它病毒或細菌病的混合感染。因此，對CD的快速診斷，對該病的防制十分重要。

迄今，已報道檢測CDV的方法有病毒分離、中和試驗、免疫熒光抗體技術、免疫組化、RT．PCR方法等，但這些方法存在著繁瑣或重復性差等不足，難以在基層推廣應用。本技術方案建立了納米抗體(Nanobody)夾心ELISA檢測方法，為CDV的快速檢測提供技術支撐。

發明內容

本發明的目的在于提供一種犬瘟熱病毒納米抗體及其檢測試劑盒。

在本發明的第一方面，提供一種犬瘟熱病毒納米抗體，所述的納米抗體為如SEQID NO 2~7任一所示的氨基酸序列，其中所述納米抗體能與犬瘟熱病毒N蛋白結合；且骨架區含有如SEQ ID NO.1所示的共同特征氨基酸序列。

在一個優選例中，所述的納米抗體中，在抗體超變區含有共同特征氨基酸序列：I**SG，其中“*”代表一個隨機氨基酸。

在本發明的另一方面，提供一種多核苷酸，其編碼為第一方面所述的納米抗體。