[發(fā)明專(zhuān)利]一種表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110631778.2
• 申請(qǐng)日: 2021-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113355296A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邊惠潔;陳志南;尉丁;張仁宇;劉滿(mǎn);楊旭;孔令敏;南剛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/01
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/01;C12N15/63;A61K35/768;A61K38/19;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.一種表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒，其特征在于，所述表達(dá)CCL19的重組溶瘤新城疫病毒為向新城疫病毒溶瘤毒株Italien株的基因組中插入人淋巴細(xì)胞趨化因子CCL19的全長(zhǎng)基因后獲得，所述CCL19基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種權(quán)利要求1所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒的構(gòu)建方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

S1，構(gòu)建重組病毒基因組質(zhì)粒pcDNA-hCCL19，轉(zhuǎn)入工程菌中；

S2，將病毒基因組質(zhì)粒pBR-rNDV和pcDNA-hCCL19質(zhì)粒分別用AgeI酶切，產(chǎn)物用T4連接酶連接獲得連接產(chǎn)物，然后轉(zhuǎn)入DH5α感受態(tài)大腸桿菌中，選擇陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序，最終獲得重組病毒基因組質(zhì)粒，命名為pBR-rNDV-hCCL19；

S3，BSR-T7/5經(jīng)消化后轉(zhuǎn)移至新的容器中，加入DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，采用PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染完成后觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，待出現(xiàn)細(xì)胞融合現(xiàn)象后表明病毒復(fù)活成功，重組病毒命名為rNDV-hCCL19。

3.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒的構(gòu)建方法，其特征在于，S3中，所述DMEM培養(yǎng)基含體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清和100μg/mL青鏈霉素。

4.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒的構(gòu)建方法，其特征在于，S3中，PEI轉(zhuǎn)染試劑的濃度為1mg/mL。

5.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒的構(gòu)建方法，其特征在于，S3中，轉(zhuǎn)染過(guò)程中，按照質(zhì)粒的質(zhì)量比pBR-rNDV-hCCL19：pCI-NP：pCI-P：pCI-L＝2:1:1:1混合。

6.一種權(quán)利要求1所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒在制備腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒在制備腫瘤治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒能夠單獨(dú)用于制備腫瘤治療藥物。

8.如權(quán)利要求6所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒在制備腫瘤治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒能夠聯(lián)合其它治療藥物制備腫瘤治療藥物。

9.如權(quán)利要求8所述的表達(dá)人CCL19的重組溶瘤新城疫病毒在制備腫瘤治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于，其它治療藥物包括但不限于腫瘤的外科手術(shù)治療藥物、放射線治療藥物、化學(xué)治療藥物、抗體治療藥物、免疫細(xì)胞治療藥物、介入治療藥物、干細(xì)胞治療藥物。