[發(fā)明專利]一種多重信號放大系統(tǒng)及其在酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110631376.2
• 申請日: 2021-06-07
• 公開（公告）號: CN113341132B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉密;彭作富
• 申請（專利權(quán)）人: 艾克發(fā)（北京）生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/58;C12Q1/6804;C12N15/11
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11489
• 代理人: 尹瑋

1.一種利用多重信號放大系統(tǒng)進(jìn)行非疾病診斷目的的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測的方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）固相基質(zhì)上固定包被抗體或者抗原；

（2）單獨(dú)加入待檢測細(xì)胞，作用一段時(shí)間，去除剩余待檢測細(xì)胞，洗滌；或同時(shí)加入待檢測細(xì)胞和細(xì)胞刺激物，作用一段時(shí)間，去除剩余待檢測細(xì)胞和細(xì)胞刺激物，洗滌；

（3）加入抗體-DNA/RNA連接鏈或者加入抗原-DNA/RNA連接鏈，作用一定時(shí)間；

（4）加入DNA/RNA放大鏈，作用一定時(shí)間；

（5）加入修飾物a修飾的DNA/RNA檢測鏈，反應(yīng)一定時(shí)間；

（6）加入可與修飾DNA/RNA檢測鏈上的修飾物a特異性結(jié)合的結(jié)合物b連接的酶；

（7）加入酶的底物進(jìn)行反應(yīng)；

（8）定量分析固相基質(zhì)上所形成的具有檢測信號的免疫斑點(diǎn)的數(shù)量；

所述DNA/RNA連接鏈、DNA/RNA放大鏈、DNA/RNA檢測鏈為以下序列組合中的一組或多組：

第一組：

連接鏈：TATTTAGTGTTCGAATAGTT，對應(yīng)放大鏈：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-ATGATGATG-T-ATGATGATG-T；

第二組:

連接鏈：TATTTAGTGTTCGAATAGTTCGATCTAG，對應(yīng)放大鏈：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-ATGATGATG-T-ATGATGATG-T;

第三組：

連接鏈：AATTCTATGACACCGCCACGCCCTATATCCTCGCAATAACCC； 對應(yīng)放大鏈：GGGTTATTGCGAGGATATAGGGCGTGGCGGTGTCATAGAATT-TT-AATACTCTC-A-(AATACTCTC-A)n-AATACTCTC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T；

第四組：

連接鏈：GTTTCCTATATTTAGCGTCCGTGTCGTTCTCCCGCGCAACAG ；對應(yīng)放大鏈： CTGTTGCGCGGGAGAACGACACGGACGCTAAATATAGGAAAC-TT-A-CAACTTAAC-A-(CAACTTAAC-A)n-CAACTTAAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T；

第五組：

連接鏈：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 對應(yīng)放大鏈：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T;

第六組：

連接鏈：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 對應(yīng)放大鏈：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第七組：

連接鏈：CAAGTCTAGTCCAAGGTCCGTCAAGGTCTCCGACGCATACTC；對應(yīng)放大鏈：GAGTATGCGTCGGAGACCTTGACGGACCTTGGACTAGACTTG-TT-CAATCAAAA-A-(CAATCAAAA-A)n-CAATCAAAA-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T；

第八組：

連接鏈：AGTTCCTGTAGTATCCCGTCGCATAGTCGTACATTCACCGTC；對應(yīng)放大鏈：GACGGTGAATGTACGACTATGCGACGGGATACTACAGGAACT-TT-CCAATAATA-A-(CCAATAATA-A)n-CCAATAATA-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-TATTATTGG-T-TATTATTGG-T；

第九組：

RNA連接鏈：AAAUUCCUCUACCACCUACA，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A- (TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十組：

RNA連接鏈：AAAUUCCUCUACCACCUACA，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A- (TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十一組：

RNA連接鏈：AAAUUCCUCUACCACCUACAUCAC，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十二組：

RNA連接鏈：AAAUUCCUCUACCACCUACAUCAC，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十三組：

DNA連接鏈：AAATTCCTCTACCACCTACATCAC，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T；

第十四組：

DNA連接鏈：AAATTCCTCTACCACCTACATCAC，對應(yīng)一級放大鏈：GTGATGTAGGTGGTAGAGGAATTT-TT-ATAAACCTA-A-(ATAAACCTA-A)n-ATAAACCTA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-T-TAGGTTTAT-TTT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-UU-GUAAAUGAA-U-GUAAAUGAA-U；

第十五組：

連接鏈：TATTTAGTGTTCGAATAGTT，對應(yīng)一級放大鏈：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；對應(yīng)二級放大鏈：ATGATGATG-T-ATGATGATG-T-ATGATGATG-TTT-TTTTCTACC-A-(TTTTCTACC-A)n-TTTTCTACC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GGTAGAAAA-T-GGTAGAAAA-T;

第十六組：

連接鏈：TATTTAGTGTTCGAATAGTTCGATCTAG，對應(yīng)一級放大鏈：CTAGATCGAACTATTCGAACACTAAATA-TT-CATCATCAT-A-(CATCATCAT-A)n-CATCATCAT-A；對應(yīng)二級放大鏈：ATGATGATG-T-ATGATGATG-T-ATGATGATG-TTT-TTTTCTACC-A-(TTTTCTACC-A)n-TTTTCTACC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GGTAGAAAA-T-GGTAGAAAA-T;

第十七組：

連接鏈：AATTCTATGACACCGCCACGCCCTATATCCTCGCAATAACCC；對應(yīng)一級放大鏈：GGGTTATTGCGAGGATATAGGGCGTGGCGGTGTCATAGAATT-TT-AATACTCTC-A-(AATACTCTC-A)n-AATACTCTC-A；對應(yīng)二級放大鏈：GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-T-GAGAGTATT-TTT-TCCTTTTAT-A-(TCCTTTTAT-A)n-TCCTTTTAT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-ATAAAAGGA-T-ATAAAAGGA-T;

第十八組：

連接鏈：GTTTCCTATATTTAGCGTCCGTGTCGTTCTCCCGCGCAACAG ；對應(yīng)一級放大鏈： CTGTTGCGCGGGAGAACGACACGGACGCTAAATATAGGAAAC-TT-A-CAACTTAAC-A-(CAACTTAAC-A)n-CAACTTAAC-A；對應(yīng)二級放大鏈：GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-T-GTTAAGTTG-TTT-CCTTCTATT-A-(CCTTCTATT-A)n-CCTTCTATT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-AATGAAAGA-T-AATGAAAGA-T

第十九組：

連接鏈：GAATCCAAATCGTCCGTTAGCAGTGAACCGTACCGTCTCAAT； 對應(yīng)一級放大鏈：ATTGAGACGGTACGGTTCACTGCTAACGGACGATTTGGATTC-TT-TTCATTTAC-A-(TTCATTTAC-A)n-TTCATTTAC-A；對應(yīng)二級放大鏈：GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-T-GTAAATGAA-TTT-TTATTCACT-A-TTATTCACT-A-(TTATTCACT-A)n-TTATTCACT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-AGTGAATAA-T-AGTGAATAA-T

第二十組：

連接鏈：CAAGTCTAGTCCAAGGTCCGTCAAGGTCTCCGACGCATACTC；對應(yīng)放大鏈：GAGTATGCGTCGGAGACCTTGACGGACCTTGGACTAGACTTG-TT-CAATCAAAA-A-(CAATCAAAA-A)n-CAATCAAAA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TTTTGATTG-T-TTTTGATTG-T-TTTTGATTGTTT-TCATTACTT-A-TCATTACTT-A-(TCATTACTT-A)n-TCATTACTT-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-AAGTAATGA-T-AAGTAATGA-T

第二十一組：

連接鏈：AGTTCCTGTAGTATCCCGTCGCATAGTCGTACATTCACCGTC；對應(yīng)一級放大鏈：GACGGTGAATGTACGACTATGCGACGGGATACTACAGGAACT-TT-CCAATAATA-A-(CCAATAATA-A)n-CCAATAATA-A；對應(yīng)二級放大鏈：TATTATTGG-T-TATTATTGG-T-TATTATTGG-TTT-TTCTTACTC-A-TTCTTACTC-A-(TTCTTACTC-A)n-TTCTTACTC-A；對應(yīng)檢測鏈：修飾物-TT-GAGTAAGAA-T-GAGTAAGAA-T；

所述n的范圍為5≤n≤200；

序列從左到右為序列的5’端到3’端。