[發明專利]一種新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽抗原及其特異性中和抗體和應用

有效

• 申請號: 202110631147.0
• 申請日: 2021-06-07
• 公開（公告）號: CN113354717B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 葉建強;李拓凡;闞秋琪;秦愛建;萬志敏;邵紅霞;謝泉
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C07K19/00;C12N15/50;C12N15/70;C07K16/10;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽抗原，其特征在于，所述廣譜多肽抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種三重新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽串聯融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

3.權利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽串聯融合蛋白的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）以pCold I質粒為模板，用核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的引物對進行PCR擴增，得到線性化pCold I表達載體；

2）以pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S 質粒為模板，用SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的引物對進行PCR擴增第一片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3所示的引物對進行PCR擴增第二片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物對進行PCR擴增第三片段；

3）利用重組酶對步驟1）中所述線性化pCold Ⅰ表達載體、步驟2）中所述第一片段、第二片段和第三片段進行快速重組克隆，得到重組質粒；

4）將步驟3）中所述重組質粒轉化細胞，經培養、IPTG誘導得到融合蛋白。

4.根據權利要求3所述構建方法，其特征在于，步驟2）中所述PCR擴增的反應程序為94℃變性5min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸3min，30個循環；最后72℃延伸10min；

所述PCR擴增的反應體系為33μl水，10μl 5倍緩沖液，1μl 10 mM dNTP，2μl 10 μmol上游引物，2μl 10 μmol 下游引物，1μl 10ng/μl的pCold Ⅰ質粒或pcDNA3.1- SARS-CoV-2-S質粒，1μl商品化的Phanta Super-Fidelity DNA 聚合酶。

5.權利要求1所述新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽抗原、權利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽串聯融合蛋白在制備SARS-CoV-2廣譜亞單位疫苗和/或免疫檢測新冠病毒SARS-CoV-2 S2抗體的試劑盒中的應用。

6.根據權利要求5所述應用，其特征在于，所述免疫檢測包括膠體金免疫檢測、免疫沉淀檢測、熒光免疫檢測和/或酶聯免疫檢測。

7.一種用于檢測新冠病毒SARS-CoV-2抗體的ELISA檢測試劑盒，其特征在于，包括抗原包被的酶標板；所述抗原包括權利要求1所述新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽抗原或權利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2廣譜多肽串聯融合蛋白。