[發(fā)明專利]一種棕櫚?；揎椀鞍椎臋z測(cè)試劑盒及其使用方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110630995.X
• 申請(qǐng)日: 2021-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113358634A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙淑娟;崔蘊(yùn)博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海胡珀生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 上海創(chuàng)開(kāi)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31374
• 代理人: 李蘭蘭

本發(fā)明公開(kāi)了一種棕櫚酰化修飾蛋白的檢測(cè)試劑盒及其使用方法，涉及蛋白檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒包括第一裂解液、第一封閉試劑、第二封閉試劑、第二裂解液、羥胺反應(yīng)緩沖液、第三裂解液、第三封閉試劑、生物素標(biāo)記物、HRP抗體，使用方法包括一次封閉、還原、二次封閉、洗脫和檢測(cè)。本發(fā)明引入離心管柱的使用，結(jié)合兩種實(shí)驗(yàn)方法，針對(duì)不同的樣品處理需求，都能很好的減少樣品損失，縮短樣品處理時(shí)間；解決了耗時(shí)長(zhǎng)，在清洗beads過(guò)程中容易吸走beads損失樣品的問(wèn)題，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)在24h內(nèi)完成，不易損失樣品，兼容WB和質(zhì)譜檢測(cè)方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種棕櫚酰化修飾蛋白的檢測(cè)試劑盒以及一種棕櫚?；揎椀鞍椎臋z測(cè)試劑盒的使用方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)了棕櫚?；堑鞍踪|(zhì)翻譯后脂質(zhì)修飾的重要形式之一，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝、凋亡、疾病的發(fā)生、發(fā)展等過(guò)程中起著重要的作用，其中，通常是飽和的16個(gè)碳的棕櫚酸鹽通過(guò)硫酯鍵共價(jià)修飾到蛋白質(zhì)Cys的巰基上。傳統(tǒng)的用于檢測(cè)棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)的方法是用放射性棕櫚酸鹽代謝標(biāo)記培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)放射自顯影檢測(cè)同位素標(biāo)記的程度，但該法操作繁瑣，使用放射性同位素有害且處理費(fèi)用高，且只能用于檢測(cè)活細(xì)胞中的棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)，存在靈敏度不高，缺乏直接富集和鑒定放射性標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法等缺陷?，F(xiàn)有技術(shù)中對(duì)蛋白質(zhì)棕櫚?；糠治龅姆椒ㄖ饕袃纱箢?lèi)，其中一大類(lèi)是以“棕櫚酸鹽為中心”的分析方法，即用含疊氮或炔基的棕櫚酸鹽類(lèi)似物代謝標(biāo)記培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)化學(xué)選擇性連接如施陶丁格連接或點(diǎn)擊化學(xué)方法，選擇性地將帶疊氮或炔基基團(tuán)的蛋白質(zhì)連接到生物素或熒光基團(tuán)上，富集或檢測(cè)棕櫚?；揎椀牡鞍踪|(zhì)；該類(lèi)方法不能分析組織樣品和體液，可能會(huì)更偏向棕櫚酸鹽更新較快的蛋白質(zhì)，棕櫚酸鹽類(lèi)似物的引入可能會(huì)導(dǎo)致無(wú)法預(yù)測(cè)的生物學(xué)效應(yīng)；另一大類(lèi)方法是“以半胱氨酸為中心”的方法，即蛋白質(zhì)提取后，先用碘乙酰胺或N-乙基順丁烯二酰亞胺等完全封閉蛋白質(zhì)Cys上所有自由巰基，再利用羥胺(HA)選擇性地切開(kāi)蛋白質(zhì)Cys和脂肪酸修飾基團(tuán)之間的巰酯鍵，產(chǎn)生新的自由巰基，再用合適的試劑如具有巰基特異反應(yīng)活性的試劑等反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化成二硫鍵連接的生物素，再進(jìn)行純化、檢測(cè)S-棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)；該法為間接檢測(cè)和純化方法，假陽(yáng)性率相對(duì)較高。

鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本申請(qǐng)的發(fā)明人擬提供一種棕櫚?；揎椀鞍椎臋z測(cè)試劑盒及其使用方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種棕櫚?；揎椀鞍椎臋z測(cè)試劑盒及其使用方法，解決了以上問(wèn)題。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明的一種棕櫚?；揎椀鞍椎臋z測(cè)試劑盒，包括：

第一溶液：為第一裂解液，由1.5ml吐溫-100、0.91g三羥甲基氨基甲烷、1.31g氯化鈉、6.5ml鹽酸，加雙蒸水至150ml刻度后制得PH7.5的混合液，于4℃保存；

第二溶液：為第一封閉試劑，采用1M TCEP阻燃劑,4℃保存；

第三溶液：為第二封閉試劑，采用0.5M NEM試劑,-20℃凍存；

第四溶液：為第二裂解液，采用1.5ml吐溫-100、0.91g三羥甲基氨基甲烷、1.31g氯化鈉、6.5ml鹽酸、加雙蒸水至150ml刻度后制得PH7.2的混合液，于4℃保存；

第五溶液：為羥胺反應(yīng)緩沖液，采用1M HAM培養(yǎng)液,-20℃凍存；

第六溶液：為第三裂解液，采用1.5ml吐溫-100、0.91g三羥甲基氨基甲烷、1.31g氯化鈉、6.5ml鹽酸，加雙蒸水至150ml刻度后制得PH6.2的混合液，于4℃保存；

第七溶液：為第三封閉試劑，采用1M IAA吲哚-3-乙酸試劑,于-20℃凍存；

第八溶液：為生物素標(biāo)記物，采用5mM Biotin-BMCC巰基反應(yīng)的生物素交聯(lián)劑，于-20℃凍存；