[發明專利]一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σC蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用

有效

• 申請號: 202110630308.4
• 申請日: 2021-06-07
• 公開（公告）號: CN113527475B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 云濤;張存;華炯鋼;葉偉成;陳柳;倪征;朱寅初
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;G01N33/569
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σC蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用。所述雜交瘤細胞分類命名為雜交瘤細胞株NDRV YT A5?B6，保藏號為CCTCC NO：C2021124。本發明雜交瘤細胞分泌的鴨新型呼腸孤病毒σC蛋白單抗，具有較高的效價，及較強的特異性。通過間接免疫熒光(IFA)和抗原表位的保守性分析表明，A5?B6McAb僅與NDRV發生特異性反應，而不與CDRV和ARV發生反應；其抗原表位序列在不同地域和不同宿主來源的NDRV分離株中具有很高的保守性。本研究結果為進一步研究σC蛋白的結構和NDRV及其抗體臨床檢測方法的建立奠定基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種分泌鴨新型呼腸孤病毒σC蛋白單抗的雜交瘤細胞、單抗及應用。

背景技術

鴨呼腸孤病毒(duck reovirus，DRV)分為兩種基因型，即Ⅰ型和Ⅱ型。基因Ⅰ型為經典鴨呼腸孤病毒(classical DRV，CDRV)，亦稱番鴨呼腸孤病毒(Muscovey duck reovirus，MDRV)，該病毒主要感染番鴨和半番鴨，引起番鴨壞死性肝炎(俗稱番鴨“白點病”或“花肝病”)，以肝脾等臟器出現大量粟粒狀壞死灶為病理特征，該病在我國始發于1997，在我國南方廣東、福建、浙江和江西等地廣泛流行；基因Ⅱ型為鴨新型呼腸孤病毒(novel DRV，NDRV)，該病毒可引起不同品種鴨(包括番鴨、半番鴨、北京鴨、櫻桃谷鴨、麻鴨)及鵝等水禽發病，其特征性病變為肝脾出現嚴重的壞死和出血(俗稱“出血性壞死性肝炎”或“脾出血壞死癥”)，該病最早發生于2000年，此后開始在我國廣東、福建、浙江、江蘇、河北、山東等省相繼暴發與流行。流行病學調查研究發現，基因Ⅱ型(NDRV)已成為我國流行的優勢基因型。

NDRV基因組由10個節段的雙鏈RNA構成，病毒粒子由二十面體對稱的雙層衣殼組成，直徑70nm、無囊膜。依據SDS-PAGE電泳結果均可將基因組分為3個大片段(命名為L1-3)，3個中片段(命名為M1-3)和4個小片段(命名為S1-4)，其基因組至少可編碼10種結構蛋白和4種非結構蛋白。σC蛋白由S1基因節段第3個ORF編碼，是構成病毒外衣殼的次要成分。研究表明，σC蛋白與病毒型特異性中和反應的表面抗原有關，能夠刺激機體產生保護性中和抗體；且該蛋白位于外衣殼的表面，可通過受體介導識別和附著靶細胞，因此具有受體功能(1、Martínez-Costas J,Grande A,Varela R,et al.1997.Protein architecture ofavian reovirus S1133 and identification of the cell attachment protein[J].Journal of Virology,71(1):59-64.；2、Shapouri M R S,Marième Kane,Letarte M,etal.1995,Cloning,sequencing and expression of the S1 gene of avian reovirus[J].Journal of General Virology,76(6):1515-1520.)。此外，σC蛋白可通過p53依賴性通路誘導宿主細胞凋亡(Shih W L,Hsu H W,Liao M H,et al.2004,Avian reovirussigmaC protein induces apoptosis in cultured cells[J].Virology,321(1):65-74.)。σC在禽呼腸孤病毒(ARV)編碼的蛋白中是最易變異的蛋白(1、Liu H J,Giambrone JJ.1997.Amplification,cloning and sequencing of theσC-encoded gene of avianreovirus[J].Journal of Virological Methods,65(2):318-318.；2、Liu H J,Lee L H,Hsu H W,et al.2003.Molecular evolution of avian reovirus::evidence forgenetic diversity and reassortment of the S-class genome segments andmultiple cocirculating lineages[J].Virology,314(1):336-349.)。NDRV、CDRV與ARV均屬于禽正呼腸孤病毒種群成員，但NDRVσC蛋白與CDRV及ARV的σC蛋白氨基酸同源性僅分別約40％和30％。目前對NDRVσC蛋白的表位抗原性信息以及是否存在型特異性抗原表位還不清楚。