[發(fā)明專利]一種用于檢測卵巢癌相關基因甲基化的核酸組合物、試劑盒和檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110626226.2
• 申請日: 2021-06-04
• 公開（公告）號: CN113186294A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 谷紅倉;錢飛箭;王云飛;車仙榮
• 申請（專利權）人: 杭州圣庭醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 杭州五洲普華專利代理事務所(特殊普通合伙) 33260
• 代理人: 姚宇吉

本發(fā)明公開了一種用于檢測卵巢癌相關基因甲基化的核酸組合物、試劑盒和檢測方法，核酸組合物，包括：RASSF1A基因目的位點的甲基化特異性引物和探針；OPCML基因目的位點的甲基化特異性引物和探針；RUNX3基因目的位點的甲基化特異性引物和探針；TFPI2基因目的位點的甲基化特異性引物和探針；ACTB內參基因的特異性引物和探針；本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的核酸組合物配置成的試劑盒具有檢測檢測卵巢癌相關基因甲基化結果準確、操作簡單、準確性高及敏感性高等優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及生物檢測技術領域，特別是一種用于檢測卵巢癌相關基因甲基化的核酸組合物、試劑盒和檢測方法。

背景技術

卵巢癌(Ovarian Cancer)是婦科最常見并嚴重威脅婦女生命和健康的惡性腫瘤之一，易于轉移和廣泛播散，其發(fā)病率低于子宮頸癌和子宮內膜癌，居婦科惡性腫瘤第3位，但病死率卻超過前兩者之和，高居婦科癌癥之首。其發(fā)病十分隱匿，轉移前常無癥狀，手術不能完全清除病灶，再加上術后化療作用局限，術后復發(fā)率高、預后差。世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(IARC)發(fā)布的2020年全球最新癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示：每年約有31.4萬例新發(fā)病例，20.7萬例死亡病例。卵巢惡性腫瘤組織類型繁多，其中上皮性卵巢癌(EpithelialOvarian Cancer，EOC)最常見，約占80-90％，是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤，高達70％。

目前卵巢癌現(xiàn)有臨床篩查、診斷方法可歸為三大類：影像學(超聲，CT，PET/CT，MRI等)，血清學(血清中腫瘤標志物如CA-125的檢測)和病理學(組織活檢，細胞學檢查等)。但所有這些方法都有不可避免的缺點，例如影像學主要缺陷在于檢測結果滯后，對受檢者造成放射性傷害；血清學標志物靈敏性及特異性差，細胞學檢測和組織活檢均有侵入性，造成患者的精神上的緊張和壓力，且靈敏度和可重復性都很差，過于依賴醫(yī)生判斷的主觀性等。因此，尋找新的無創(chuàng)、精確的檢測方法婦科腫瘤的早期診斷和篩查是當前臨床上亟待解決的問題。

隨著技術上的快速發(fā)展，腫瘤分子標志物發(fā)展成為繼影像診斷、病理診斷之后的腫瘤診斷治療新的領域，對腫瘤的診斷、監(jiān)測和治療產(chǎn)生了重大影響。腫瘤分子標志物可以在體液或組織中檢測到，能夠反映腫瘤的存在、分化程度、預后估計和判斷治療效果等。目前基因診斷技術不斷發(fā)展，給卵巢癌的早期診斷帶來了希望，其中一個領域就是通過DNA甲基化檢測來判斷病人是否患有癌癥。DNA反常甲基化是腫瘤分子病理改變的一個組成部分，依據(jù)DNA反常甲基化的已經(jīng)成為腫瘤診斷的一個可靠靶標。DNA異常甲基化通常出現(xiàn)在腫瘤發(fā)生的早期，因此可以作為腫瘤篩查或診斷的依據(jù)。此外，DNA甲基化的“成簇”性出現(xiàn)推動基于液體活檢的腫瘤早篩。事實上,目前基于DNA異常甲基化的檢測已經(jīng)成為腫瘤早期診斷、患病風險預測、臨床病程監(jiān)控和療效評估的最有希望的技術手段。

TFPI-2組織因子途徑抑制物-2(Tissue Factor Pathway Inhibitor-2，TFPI-2)，又稱胎盤蛋白-5(Placental Protein 5，PP-5)或基質相關性絲氨酸蛋白酶抑制劑(Matrix-associated Serine Protease inhibitor，MSPI)，是一種帶有Kunitz型結構域的蛋白酶抑制劑，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物超家族成員，可能通過影響細胞外基質的重塑參與組織發(fā)生、胚胎發(fā)育分化、傷口愈合、腫瘤的侵襲轉移和動脈粥樣硬化斑塊破裂等生理病理過程。

RASSF1A(Ras Association Domain Family Member 1)基因編碼類似于RAS效應蛋白的蛋白質，是潛在的腫瘤抑制因子。RASSF1A調控的靶基因涉及基因轉錄、信號轉導、細胞骨架、細胞周期、細胞黏附及調亡等多方面內容，具有廣泛的生物學作用。而RASSF1A作為一種新型腫瘤抑制基因，其在腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中的作用尤為重要。目前認為，RASSFIA基因表達失活主要與啟動子區(qū)異常的高甲基化、雜合性缺失及染色體缺失有關。人類腫瘤中RASSF1A基因失活的頻率非常高。例如，RASSF1A基因在70％以上的小細胞肺癌，91％的腎細胞癌，62％的膀胱癌，71％的甲狀腺癌，84％的鼻咽癌及70％以上的前列腺癌等中處于高甲基化狀態(tài)進而失活。