[發明專利]一組GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突變體及其應用

有效

• 申請號: 202110621950.6
• 申請日: 2021-06-04
• 公開（公告）號: CN113416721B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 游帥;查子千;謝晨;張溫馨;張訪;王雪;陳奕文;王俊
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/81;C12N1/19;A23K10/10;C12R1/84
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

一組GH16家族葡聚糖酶的N?糖基化突變體及其應用，包括TlGlu16A_A62T和RhGlu16B_N57A，所述TlGlu16A_A62T的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；RhGlu16B_N57A的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。最終驗證表明此N?糖基化位點對GH16家族葡聚糖酶的熱穩定性和催化活力具有重要影響。在此改造條件下，發生N?糖基化突變體的熱穩定性和催化效率有顯著增強。本發明通過Ala62位點的改造可以大大提高葡聚糖酶的熱穩定性和催化效率，并對GH16家族葡聚糖酶及其它糖苷水解酶的熱穩定性和催化效率改良具有重要的指導意義，還為其在工業生產的應用提供了基礎。

技術領域

本發明涉及基因工程、蛋白質工程領域，具體涉及一組GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突變體及其應用。

背景技術

纖維素類物質包括纖維素、半纖維素和木質素，是自然界中常見的、最豐富的可再生資源。半纖維素一般指自然界植物細胞壁中除果膠和纖維素類成分之外的其他聚糖類物質，主要包括葡聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖。其中，β-葡聚糖是一類非淀粉葡萄糖聚合物，其包含通過β-糖苷鍵連接的β-葡萄糖殘基。

β-葡聚糖酶是內切β-1,3-1,4-葡聚糖酶和外切β-1,3-1,4-葡聚糖酶的總稱。他作用域葡聚糖的β-1,3和β-1,4糖苷鍵，使β-葡聚糖分解成寡糖。它是我們日常生活中重要的膳食纖維，它可以通過降低膽固醇和血糖來影響我們的代謝活動。飼料工業中β-葡聚糖酶通過降解β-葡聚糖，降低食糜粘度，促進營養物質的消化與吸收來提高飼料利用率。β-葡聚糖酶也可用于食品釀造行業，可溶性β-1,3-葡聚糖可用作免疫激活劑，它還可以參與細胞分化和防御真菌病原體。

糖基化是真核細胞中最常見的翻譯后修飾方法之一。N-糖基化是新生肽鏈的共翻譯或翻譯后修飾方法。它在蛋白質生物學功能的發展中起著至關重要的作用，如蛋白質折疊、細胞識別等。許多研究表明，N-糖基化對表達的重組酶的活性、熱穩定性和分泌效率有重要影響。N-糖基化對酵母中表達的重組酶有重要影響。可以使用各種方法對這些影響進行理性或半理性的分析。以往的研究提供了許多可行的策略。基于這些理論和方法，在重組酶的特定位點添加或去除N-糖基化可以改善重組酶的特性。

針對飼料業、食品制造業等工業需求，獲得具有優良特性的β-葡聚糖酶仍具有重大意義。

發明內容

解決的技術問題：本發明提供一種GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突變體及其應用，該突變體為定點突變后篩選得到。

技術方案：一組GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突變體，包括TlGlu16A_A62T和RhGlu16B_N57A，所述TlGlu16A_A62T的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；RhGlu16B_N57A的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一組GH16家族葡聚糖酶的N-糖基化突變體，所述TlGlu16A_A62T的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；該位點反向驗證葡聚糖酶突變體RhGlu16B_N57A的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。

一種重組載體，含有上述核苷酸序列。

一種重組菌株，含有上述重組載體。

所述重組菌株在制備飼料添加劑中的應用。