[發明專利]一種-D-稀有血型篩選試劑及其應用

在審

• 申請號: 202110620231.2
• 申請日: 2021-06-03
• 公開（公告）號: CN113341163A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 趙俸涌;朱自嚴;向東;張玉宇;王中英
• 申請（專利權）人: 上海市血液中心
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明涉及一種?D?稀有血型篩選試劑，由以下體積比的各試劑組成：聚凝胺試劑：IgG抗?D試劑：LIM液＝1:29:5，其中聚凝胺試劑作為增強劑，IgG抗?D作為檢測試劑、LIM液作為穩定劑，該篩選試劑可有效對?D?表型及其基因攜帶者進行初步篩選。其優點表現在：本發明所述試劑去除了常規的輔助試劑“重懸液”；使用了稀釋的IgG抗?D試劑，省略了抗球蛋白配套試劑，所有試劑混合后形成新型篩查試劑，加入待測紅細胞即可進行篩查實驗，再配合微量板使用可實現大批量快速篩查。該試劑具有材料費用低，操作簡便，快速，結果穩定清晰等優點，便于?D?血型的大規模篩查，且能實現篩查?D?雜合基因樣本。

技術領域

本發明涉及血液檢測技術領域，具體地說，是一種-D-稀有血型篩選試劑及其應用。

背景技術

Rh血型系統是除ABO血型系統外，人類最重要的血型系統，該系統血型同種抗體在我國是輸血免疫反應的最大誘因(AventND，blood,2000)。-D-表型是Rh血型系統中較為稀有的表型，根據國外數據統計，其發生概率約為1/10萬，由于該表型僅有RhD抗原而不表達RhCE抗原，因此正常D陽性紅細胞輸注皆會存在引發Rh血型系統溶血性輸血反應風險，威脅患者生命(Daniels G,Human Blood Groups.2nd ed,2002)，因此常規檢測中，對該表型進行篩查及血液資源保存是保證該表型患者輸血安全的重要保證。

目前該血型表型的篩選方法主要依靠單克隆抗體篩選(抗-Rh17(RhCE蛋白)，日本血液中心)與基因篩選(德國、法國血液保障系統)兩種方式。單克隆方法由于單克隆抗體為實驗室自制，目前尚無市售商品化試劑，因此無法在我國開展應用；基因篩查方法成本較高，且大部分僅可針對已發現的突變位點，因此會造成漏檢；此外，上述方法皆無法對-D-表型基因攜帶者(即RhD--基因攜帶者)進行篩查，不利于該血型表型的基因背景與人群發生頻率研究。

血清學凝集實驗是稀有血型篩查的常規方法，該方法檢測的對象是抗原抗體復合物，該方法操作簡便，所需儀器簡單，是最適合稀有血型篩查工作的方法之一(Fung MK,19th ed.AABB Press,2017)。因此利用此方法建立-D-表型篩選體系是最具實踐意義的方法。

-D-表型較其他正常D陽性表型細胞，其發生機理為RhCE基因沉默或被RhD基因取代，表現為RhCE蛋白缺失而D抗原表達量遠高于正常D陽性細胞(約為正常D陽性細胞D抗原表達量的4-6倍)(Huang CH,Blood.1995)。因此，本發明利用這一差異性作為篩選指標可解決-D-稀有血型篩選的問題。

本發明首次提出基于抗原表達差異使用IgG抗-D作為檢測劑、聚凝胺試劑作為增強劑、LIM液作為穩定劑的-D-純合子、雜合子篩選試劑，為人群中-D-基因背景及頻率的研究提供了可操作性方案。關于本發明一種-D-稀有血型篩選試劑及其應用目前還未見報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種-D-稀有血型篩選試劑及其應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

原理：由抗原抗體反應平衡公式(見下方)可知，由于相同細胞濃度時-D-表型細胞與正常D陽性細胞二者Ab濃度具有顯著性差異，因此可利用此原理使得-D-表型細胞發生凝集而正常D陽性細胞不發生凝集，從而達到篩選的目的。

Ka：親和力常數(僅與抗體本身性質及反應介質有關)

[Ab·Ag]：抗原抗體復合物濃度

[Ab]：游離抗體濃度

[Ag]：游離抗原濃度