[發明專利]一種抗菌脂肽類化合物的制備方法

在審

• 申請號: 202110618266.2
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113293110A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 叢麗娜;王曉坤;何媛媛;徐放
• 申請（專利權）人: 大連海象生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/06;C12R1/125
• 代理公司: 沈陽一諾君科知識產權代理事務所(普通合伙) 21266
• 代理人: 劉麗娟

1.一種抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、取枯草芽孢桿菌菌株，接種于斜面LB培養基上，于30℃培養24h，挑取單菌落，接種于液體LB培養基，于30℃搖瓶培養16-18h，得到枯草芽孢桿菌活化液，所述枯草芽孢桿菌活化液的OD₆₀₀為0.8-1.0；

步驟二、將枯草芽孢桿菌活化液接種于發酵培養基中，所述枯草芽孢桿菌活化液的接種量為4-8％，于28-32℃，150-210r/min旋轉條件下發酵培養36-60h，得到發酵液；

步驟三、將所述發酵液離心，得到發酵上清液；

步驟四、調節所述發酵上清液的pH＝2，靜置2-8h，離心收集沉淀；再用甲醇反復抽提，使用旋轉蒸發儀干燥其抽提液，得到抗菌脂肽類化合物脂肽提取物。

2.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟一中，所述LB培養基由如下質量百分比的組分組成：胰蛋白胨1％、酵母浸粉0.5％、氯化鈉1％，所述LB培養基的pH值為7.2-7.4。

3.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟二中，發酵培養基由如下質量百分比的組分組成：糖0.5％-2.5％、蛋白胨0.5％-3％、金屬離子化合物以金屬離子計0.01％-1％，所述金屬離子為鋅離子、鉀離子、鎂離子、錳離子中的一種或多種，所述糖為葡萄糖、蔗糖、甘油中的一種或多種，所述蛋白胨為胰蛋白胨、牛骨蛋白胨、大豆蛋白胨中的一種或多種，所述發酵培養基的pH值為6.0-8.0。

4.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟三中，離心轉速為4000-10000r/min，離心時間為10-20min。

5.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟四中，離心轉速為4000-10000r/min，離心時間為5-15min。

6.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟四中，使用4-8mol/L的HCl溶液調節發酵上清液的pH值。

7.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟四中，旋轉蒸發儀干燥溫度為50-70℃。

8.根據權利要求1所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟二中，枯草芽孢桿菌活化液的接種量為5％。

9.根據權利要求3所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基由如下質量百分比的組分組成：糖1％、蛋白胨1.5％、金屬離子化合物以金屬離子計0.54％。

10.根據權利要求3所述的抗菌脂肽類化合物的制備方法，其特征在于，所述鉀離子以磷酸氫二鉀的形式添加，所述鎂離子以硫酸鎂的形式添加，所述錳離子以硫酸錳的形式添加。