[發(fā)明專利]檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的特異性引物、探針及快速檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110613261.0
• 申請(qǐng)日: 2021-06-02
• 公開（公告）號(hào): CN113278737A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘曉藝;藺凌云;沈錦玉;姚嘉赟;尹文林;黃雷;袁雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省淡水水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 成都天匯致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒?1的特異性引物、探針及快速檢測(cè)試劑盒，其中，黃顙魚小RNA病毒?1熒光定量檢測(cè)試劑盒包括特異性引物組A和Taqman熒光探針B；本發(fā)明采用熒光定量技術(shù)，通過檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒?1的衣殼蛋白基因，來(lái)檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒?1，這是目前國(guó)內(nèi)外首次研制檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒?1的引物組和試劑盒。該試劑盒的研制為黃顙魚小RNA病毒?1病的監(jiān)測(cè)和預(yù)防奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于靶RNA片斷的快速檢測(cè)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的特異性引物、探針及快速檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

黃顙魚小RNA病毒-1(Yellow catfish Picornavirus，YCPRV-1)是黃顙魚潛在的致病性病原。其對(duì)黃顙魚具有一定的致病力，常引起黃顙魚體表出血、腸炎，少數(shù)病魚肝臟有出血點(diǎn)。其引起的疾病對(duì)黃顙魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)危害較大。YCPRV-1為單鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科，未確定屬的分類地位，通過基因組比較發(fā)現(xiàn)，與該病毒基因組同源性最高的病毒為日本海鰻小RNA病毒(Conger japonicus Calicivirus)，同源性為38％，表明黃顙魚小RNA病毒-1是一種全新的病毒，與已知小RNA病毒科中的其它任何病毒都不同。該病毒由發(fā)明人于2018年6月從黃顙魚中分離所得，其基因組也由發(fā)明人首先獲得，其基因組包含兩個(gè)編碼框，全長(zhǎng)為7149bp。我國(guó)是黃顙魚養(yǎng)殖大國(guó)，黃顙魚病害發(fā)生率影響著廣大魚民的經(jīng)濟(jì)收入，近幾年來(lái)，由于黃顙魚病害的頻發(fā)，已給廣大養(yǎng)殖戶造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。黃顙魚小RNA病毒-1在國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道，該病毒至今也未有檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法報(bào)告，這嚴(yán)重阻礙了該病毒引起疾病的預(yù)警與預(yù)防工作，因此，對(duì)該病毒檢測(cè)試劑盒的開發(fā)和檢測(cè)技術(shù)的研究迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明針對(duì)上述問題，提供了一種檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的特異性引物、探針及快速檢測(cè)試劑盒，本發(fā)明的引物、探針和試劑盒特異性強(qiáng)，敏感性高，能實(shí)現(xiàn)快速、有效且準(zhǔn)確檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1；本發(fā)明中的試劑盒為熒光定量檢測(cè)試劑盒，該試劑盒在封閉的情況下判斷結(jié)果，擴(kuò)增產(chǎn)物不會(huì)對(duì)檢測(cè)環(huán)境造成污染，可用于黃顙魚小RNA病毒-1病的監(jiān)測(cè)和早期預(yù)警與預(yù)防。本發(fā)明采用熒光定量技術(shù)，通過檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的衣殼蛋白基因，來(lái)檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1，這是目前國(guó)內(nèi)外首次研制的檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的試劑盒；該試劑盒的研制為黃顙魚小RNA病毒-1病的監(jiān)測(cè)和預(yù)防奠定基礎(chǔ)。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還公開了一種檢測(cè)黃顙魚小RNA病毒-1的引物探針混合物，其由引物組A和Taqman熒光探針B組成，探針B的5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。

進(jìn)一步地，引物組A包含引物YCPRV-1-q85F和引物YCPRV-1-q85R；

引物YCPRV-1-q85F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

引物YCPRV-1-q85R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

探針B的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

進(jìn)一步地，熒光報(bào)告基團(tuán)選自6-羧基熒光素、六氯-6-甲基熒光素、VIC熒光染料、四氯-6-羧基熒光素、羧基-X-羅丹明、6-羧基四甲基羅丹明、磺酰羅丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基熒光素琥珀酰亞胺酯、花菁3、花菁3.5、花菁5和花菁5.5中的一種或幾種；所述熒光淬滅基團(tuán)選自6-羧基四甲基羅丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬滅劑1、黑洞淬滅劑2或黑洞淬滅劑3中的一種或幾種。

本發(fā)明還公開了一種黃顙魚小RNA病毒-1熒光定量檢測(cè)試劑盒，包括特異性引物組A和Taqman熒光探針B。

進(jìn)一步地，Taqman熒光探針B核苷酸序列5’端標(biāo)記HEX，3’端標(biāo)記BHQ1。