[發(fā)明專利]一種中華鱘F2

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110609939.8
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113367122A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田華;廖小林;朱濱;李鍵庸;田永勝;楊波
• 申請（專利權(quán)）人: 水利部中國科學(xué)院水工程生態(tài)研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 寧波博靈知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33424
• 代理人: 唐澎淞

1.一種中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，包括以下具體步驟：

1)親魚催產(chǎn)：B超檢查性腺，挑選性腺發(fā)育至Ⅳ期、健壯無疾病的中華鱘F2雄魚，稱重、根據(jù)重量注射促黃體素釋放激素后放入暫養(yǎng)池培育；

2)鮮精采集：14-20h后采集精液在4℃冷藏避光保存；

3)鮮精活力檢測：測定精子質(zhì)量，在顯微鏡下進行觀察，選擇鮮精平均活力達80％、快速運動達10秒、壽命達80秒的精子進行凍存；

4)凍存液配制：凍存液包括精子稀釋液和抗凍劑，中華鱘F2精子稀釋液用超純水配制，配方：蔗糖23.4mmol/L，Tris 30mmol/L，KCl 0.25mmol/L，調(diào)節(jié)pH值到8.0，置于4℃冰箱冷藏備用；采用甲醇作為抗凍劑，并提前置于4℃冰箱預(yù)冷；將4℃預(yù)冷的稀釋液與甲醇按照4:1的體積比配制凍存液；

5)精液稀釋：取4℃預(yù)冷的凍存液到玻璃燒杯中，取等體積預(yù)冷的鮮精混勻，混勻后立即分裝到1.8mL的凍存管，每管分裝1-1.5mL；

6)冷藏平衡：分裝完成后，將凍存管裝到布袋中，于4-6℃冰箱中平衡15min；

7)降溫入液氮：平衡完畢，取出布袋，在液氮表面上方10cm處平衡10min后，投入-196℃的液氮中長期保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所示的中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，步驟1)中，所述的促黃體素釋放激素為：注射用促黃體素釋放激素A2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所示的中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，所述的促黃體素釋放激素用量為1μg/kg。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所示的中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，步驟2)中，采集精液的具體操作為：用有刻度帶蓋的500mL廣口塑料瓶采用腹部擠壓法采集精液，采精時避免吸到尿液、糞便及血液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所示的中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，步驟3)中，具體操作為：在10×10倍生物顯微鏡下進行觀察，選擇鮮精平均活力達80％、快速運動達10秒、壽命達80秒的精子進行凍存。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所示的中華鱘F₂精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于，同一尾中華鱘F2采集的精子可重復(fù)步驟4)-7)進行凍存。