[發明專利]一種臍帶間充質干細胞凍存液

有效

• 申請號: 202110609209.8
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113331176B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 王京;陳帥
• 申請（專利權）人: 零下十八度（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;A01N1/02
• 代理公司: 南京中高專利代理有限公司 32333
• 代理人: 盧丹丹

本發明涉及一種間充質干細胞凍存液，其包含一種Caspase單克隆抗體，該單克隆抗體具有較好的結合Caspase蛋白的能力。通過在凍存液中添加相應的抗體后，能夠有效的提高細胞凍存后的存活率，有利于臍帶間充質干細胞的保存及應用，具有較好的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物領域，更具體的涉及一種間充質干細胞凍存液。

背景技術

臍帶血中造血干細胞和間充質干細胞含量相對豐富，且其間充質干細胞可在一定條件下在體外誘導分化成為多種組織細胞，利于修復病變或損傷的組織細胞，廣泛應用于臨床，目前主要應用于血液系統惡性腫瘤、軟骨及骨的修復再生、損傷神經的修復，以及肝臟疾病的治療等。

近年來，臍帶血干細胞移植已逐漸成為應用于臨床治療多種惡性和非惡性血液系統疾病的重要手段之一。既往研究認為干細胞白血病SCL基因和急性T淋巴細胞白血病TALl融合基因在造血系統中扮演著重要角色，有學者將SCL以及TALl基因通過病毒轉染進入臍帶血CD34+干細胞中，實驗發現臍帶血CD34+干細胞中SCL以及TALl基因以及MEK/ERK磷酸化都對機體造血功能產生影響，且SCL以及TALl基因在其中占主導作用，其可以調節信號通路MEK/ERK磷酸化。同時，因臍帶血中同時含有大量間充質干細胞，其可以通過細胞間作用、分泌造血生長因子及細胞因子等作用.促進造血干細胞的增殖及分化。曾有人將間充質干細胞聯合臍帶血治療造血干細胞移植失敗的血液系統疾病患者.實驗結果發現移植聯合臍帶血的間充質干細胞是一種有效的治療方法，且其可以減少移植物排斥反應的發生以及減少血液腫瘤的再發生幾率。同樣，有研究者通過將臍帶血間充質干細胞和淋巴細胞聯合培養，發現聯合培養后淋巴細胞的增殖能力被抑制，尤其是CD8+淋巴細胞亞型.但CD4+T淋巴細胞亞型明顯增加，另外臍帶血間充質干細胞能夠減少Thl和Tcl細胞群，增加Th2和Te2細胞群，所以認為臍帶血干細胞在抑制和減少臨床移植物抗宿主病方面具有較大的潛力。總的來說，越來越多的臨床案例發現同種異體造血干細胞移植存在一定的移植物抗宿主反應等不良反應，近年研究表明利用UCBT可以明顯減少上述不良反應.而且其具有來源豐富、免疫原性低以及分化成多種造血細胞的潛力等優點，還可通過釋放各種趨化因子、細胞因子、黏附因子促進HSCs歸巢，在促進機體造血微環境成熟、加快造血系統重建等方面具有明顯促進作用，成為目前血液系統疾病研究的熱點之一。

雖然臍帶血干細胞具有來源豐富、采集方便、對供者無傷害，不受倫理、法律的限制、分化能力更強、免疫原性更低等諸多有點，使得其在上述疾病的治療方面表現出了可觀的臨床前景，但是在臨床技術成熟前所面臨的問題還有很多。因臍帶血中干細胞絕對值偏低，限制了其在臨床的應用.所以如何改進培養方法、提高培養成功率特別是冷凍保存的方法是急需解決的問題。

此前的研究表明，隨著對低溫凍存理論的深人認識，人們發現細胞凋亡參與了細胞冷凍損傷的分子機制，造血干細胞凋亡嚴重損害其克隆形成能力和移植后的造血重建功能。Caspase家族成員是凋亡級聯反應的重要效應蛋白酶，抑制Caspase表達能改善多種細胞凍存后的存活率。使用Caspase抑制劑zVAD-fmk對干細胞進行凍存，發現具有較好的凍存效果。但是目前的研究中，Caspase抑制劑的種類還不夠豐富，可供選擇的類型還不夠多，而且zVAD-fmk本身對于細胞并不是完全沒有活性的影響，使得研究Capase抑制劑變得迫在眉睫。

發明內容

本發明克服現有技術缺陷，提供了一種Capase單克隆抗體及其用。

一方面，本發明提供一種Capase單克隆抗體，所述單抗的輕鏈可變區和重鏈可變區序列分別如下所示：

輕鏈可變區(SEQ ID NO：1)

DIVITQSPALMAASPGEKVTITCCPMKSAACICMKWYQQKSGISPKPWIYEYHYDTQGVPARFSGSGSGTSYSLTITSMEAEDAATYYCHYVEVDAGSFGAGTKLELK

重鏈可變區(SEQ ID NO：2)