[發明專利]一種淋巴細胞分離液及其制備方法

在審

• 申請號: 202110607339.8
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113502264A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發明（設計）人: 沈超;沈其;宋桂芳
• 申請（專利權）人: 無錫華精生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;C12N5/0783
• 代理公司: 江蘇弘揚知識產權代理有限公司 32495
• 代理人: 龍禮妹

本發明公開了一種淋巴細胞分離液及其制備方法，其特征在于，包括以下組分：甘油、乙醇、蔗糖、葡甲胺、泛影酸和環氧氯丙烷，通過將蔗糖與泛影酸加入乙醇溶液中，合成水溶性聚蔗糖乙醇溶液，作為分子篩分離液；再將葡甲胺與環氧氯丙烷加入甘油中，在室溫下，配制成澄清的生物溶液，并將生物溶液放置于透析紙袋中，將其放入去離子水中離子置換培養一段時間后，檢測其不含多余的雜質離子；然后，使用氫氧化鈉和鹽酸調節上述兩種溶液制備得到的溶液的pH值為合適范圍；最后將調節pH值穩定后的兩種溶液混合，攪拌均勻，得到淋巴分離液，本發明分離淋巴細胞效率高，分離純度高，提高淋巴細胞的質量，可獲得高質量的淋巴細胞，適用于臨床推廣和應用。

技術領域

本發明涉及淋巴細胞分離技術領域，特別涉及一種淋巴細胞分離液及其制備方法。

背景技術

純淋巴細胞群的分離純化，主要利用單細胞粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，將單個核細胞懸液中的單核細胞吸附除去，從而獲得純淋巴細胞群。

目前主要通過粘附貼壁法、吸附柱過濾法、梯度離心分離方法分離淋巴細胞，現有的分離方法存在操作步驟繁瑣，技巧性較強，對操作者的經驗要求比較高，分離效果將大受影響，甚至分離不出淋巴細胞層，此外，分離液大多具有一定的毒性，影響分離效果和分離后的細胞質量，導致分離效率較低。例如，市面上存在的淋巴細胞分離液產品：葡聚糖，羥乙基淀粉、泛影酸鈉，它們都具有一定毒性。

因此，尋求一種安全性高的淋巴細胞分離液成為本領域技術人員亟待解決的問題。

針對現有技術的缺點，目前尚沒有解決方案。

發明內容

針對相關技術中的上述技術問題，本發明提出一種淋巴細胞分離液及其制備方法，能夠克服現有技術的上述不足。

為實現上述技術目的，本發明采用的技術方案是這樣實現的：

一種淋巴細胞分離液，包括以下組分：包括質量百分比為5-20%的甘油、質量百分比為2-15%的乙醇、質量百分比為7-20%的蔗糖、質量百分比為3-12%的葡甲胺、質量百分比為4-15%的泛影酸和10-20%環氧氯丙烷，所述分離液余量為去離子水，所述分離液的總量為100%。

進一步的：質量百分比分別為：甘油5-12%、乙醇2-8%、蔗糖7-15%、葡甲胺3-5%、泛影酸4-9%和環氧氯丙烷10-15%。

進一步的：甘油7-15%、乙醇4-10%、蔗糖9-18%、葡甲胺5-9%、泛影酸6-13%和環氧氯丙烷12-18%。

進一步的：甘油9-20%、乙醇6-15%、蔗糖12-20%、葡甲胺8-12%、泛影酸9-15%和環氧氯丙烷15-20%。

一種淋巴分離液的制備方法，包括以下步驟：

1）將蔗糖與泛影酸加入乙醇溶液中，合成水溶性聚蔗糖乙醇溶液，作為分子篩分離液；

2）將葡甲胺與環氧氯丙烷加入甘油中，在室溫下，配制成澄清的生物溶液，并將生物溶液放置于透析紙袋中，將其放入去離子水中離子置換培養一段時間后，檢測其不含多余的雜質離子；

3）使用氫氧化鈉和鹽酸調節步驟1與步驟2制備得到的溶液的pH值，調節pH在6.5-7.5的范圍內；

4）將步驟3調節pH穩定后的兩種溶液混合，攪拌均勻，得到淋巴分離儲備液；

5）將步驟4中淋巴分離液儲備液進行真空濃縮成密度為1.077-1.078g/cm³的淋巴分離液溶液，用于淋巴細胞的分離。

作為本發明的優選實施方式，所述蔗糖和泛影酸在乙醇溶液中，在40°C下，反應12小時，所述蔗糖和泛影酸優選質量比為7-15%：4-9%，所述乙醇質量比為2-8%。

作為本發明的優選實施方式，所述葡甲胺與環氧氯丙烷和甘油的質量比為3-5%：10-15%：5-12%。