[發明專利]一種檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法

在審

• 申請號: 202110605828.X
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113295870A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 褚劍;郭德斌;彭娟;劉薇;李軍;葉一雋
• 申請（專利權）人: 江西煌上煌集團食品股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 黃攀

本發明公開了一種檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，所述方法包括如下步驟：步驟一，制備出洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的完全抗原，采用多標品篩查方式，篩選獲得交叉反應率在10％以下的高特異性抗洛美沙星單抗、抗培氟沙星單抗、抗氧氟沙星單抗、抗諾氟沙星單抗以及抗恩諾沙星單抗；步驟二，基于聚集誘導發光材料，采用多重檢測技術，建立多重聚集誘導發光免疫層析快速檢測方法，以監測畜禽產品中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的殘留量。本發明提出的檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，能有效解決檢測中的假陰性問題，滿足了實際檢測需求。

技術領域

本發明涉及醫藥檢測技術領域，特別涉及一種檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法。

背景技術

在醫藥領域中，抗原抗體是免疫層析技術的關鍵。國內外關于喹諾酮類獸藥殘留快速檢測，大多數為能識別多個喹諾酮類藥物的群選性單克隆抗體，亦有針對單個藥物如洛美沙星、培氟沙星以及氧氟沙星的殘留報道。

具體的，除了針對其它類似恩諾沙星、環丙沙星等其它喹諾酮類獸藥的交叉反應率較大(交叉反應率大于10％)的特點，幾乎沒有特異性地識別洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星這5種獸藥的單抗文獻報道。這除了主要歸因于喹諾酮類藥物結構的高度相似性，還由于在細胞篩選時采用單一標品篩選，使得錯失高度特異性的細胞系。目前，國內外市場上免疫層析產品主要集中在膠體金快速檢測卡，膠體金免疫分析方法的檢測限太高，容易出現假陰性問題，使得初篩失去了意義。聚集誘導發光熒光微球(AIEFM)可以在特定的底物誘導下形成聚集體，熒光效率出現顯著的增加，從而實現對刺激源的定性分析和定量檢測，使高靈敏度的在線傳感監測變得更加容易。

然而，目前并未出現能夠針對畜禽產品中的這5種喹諾酮類獸藥(洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星)的聚集誘導發光免疫層析檢測方法，無法很好地滿足實際檢測需求。

發明內容

為此，本發明是為了解決現有技術中，國內外市場上免疫層析產品主要集中在膠體金快速檢測卡，膠體金免疫分析方法的檢測限太高，容易出現假陰性問題，使得初篩失去了意義。

本發明提出一種檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，所述獸藥殘留為喹諾酮類獸藥殘留，所述喹諾酮類獸藥包括洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星殘留，所述方法包括如下步驟：

步驟一，完全抗原以及單克隆抗體的制備：

制備出洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的完全抗原，采用多標品篩查方式，篩選獲得交叉反應率在10％以下的高特異性抗洛美沙星單抗、抗培氟沙星單抗、抗氧氟沙星單抗、抗諾氟沙星單抗以及抗恩諾沙星單抗；

步驟二，多重聚集誘導發光免疫層析法的建立及檢測：

基于聚集誘導發光材料，采用多重檢測技術，建立多重聚集誘導發光免疫層析快速檢測方法，以監測畜禽產品中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的殘留量。

本發明提出的檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，首先制備出洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的完全抗原，采用多標品篩查方式，篩選獲得交叉反應率在10％以下的高特異性抗洛美沙星單抗、抗培氟沙星單抗、抗氧氟沙星單抗、抗諾氟沙星單抗以及抗恩諾沙星單抗；然后基于聚集誘導發光材料，采用多重檢測技術，建立多重聚集誘導發光免疫層析快速檢測方法，以監測畜禽產品中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星以及恩諾沙星的殘留量。本發明提出的檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，利用聚集誘導發光熒光微球可在特定的底物誘導下形成聚集體，使得熒光效率出現顯著增加的特點，從而實現對刺激源的定性分析和定量檢測，使高靈敏度的在線傳感監測變得更加容易。

所述檢測獸藥殘留的多重聚集誘導發光免疫層析方法，其中，在所述步驟一中，洛美沙星的完全抗原的制備方法包括如下步驟：