[發明專利]噬菌體制劑的制備方法、藥物組合物以及應用

在審

• 申請號: 202110605266.9
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113528458A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 馬迎飛;譚新
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12M1/12;C12M1/00;A61K35/76;A61P31/04
• 代理公司: 深圳市威世博知識產權代理事務所(普通合伙) 44280
• 代理人: 黎堅怡

本申請涉及生物技術領域，具體公開了一種噬菌體制劑的制備方法、藥物組合物以及應用，該方法包括：通過切向流系統，將噬菌體混合培養液滲濾，得到噬菌體原始液；通過切向流系統，將噬菌體原始液濃縮，直到濃度為噬菌體原始液的濃度的7～10倍，得到噬菌體濃縮液；采用氯化銫溶液對噬菌體濃縮液進行氯化銫密度梯度離心，得到噬菌體密度梯度液；采用20KD膜對噬菌體密度梯度液進行透析，得到噬菌體制劑。通過上述方式，本申請能夠快速、低成本、高效地去除噬菌體制劑中的內毒素。

技術領域

本申請涉及生物技術領域，特別是涉及一種噬菌體制劑的制備方法、藥物組合物以及應用。

背景技術

在制備噬菌體的原始液中由于細菌的裂解，含有大量的毒副產物，如內毒素、肽聚糖、細菌染色體和其他不明物質等雜質，這些雜質在進入人體后會引起機體嚴重的炎癥反應甚至敗血癥性休克。這限制了噬菌體在臨床的大規模應用。

本申請發明人在長期研發過程中，發現已有多種方法可去除噬菌體原始液中的雜質，在各大實驗室常用的有：使用聚乙二醇富集噬菌體，隨后再用氯仿去除引入的聚乙二醇；直接使用正辛醇萃取內毒素；或者使用層析(陰離子交換柱)柱純化噬菌體等方法。但這些方法引入了有機溶劑，對人體健康是有潛在風險的，并且這些方法也存在噬菌體濃度不穩定，內毒素去除效果不佳等問題。

發明內容

本申請實施例提供了一種噬菌體制劑的制備方法、藥物組合物以及應用，以快速、低成本、高效地去除噬菌體制劑中的內毒素。

為解決上述技術問題，本申請采用的一個技術方案是：提供一種噬菌體制劑的制備方法，該方法包括：通過切向流系統，將噬菌體混合培養液滲濾，得到噬菌體原始液；通過切向流系統，將噬菌體原始液濃縮，直到濃度為噬菌體原始液的濃度的7～10倍，得到噬菌體濃縮液；采用氯化銫溶液對噬菌體濃縮液進行氯化銫密度梯度離心，得到噬菌體密度梯度液；采用20KD膜對噬菌體密度梯度液進行透析，得到噬菌體制劑。

為解決上述技術問題，本申請采用的另一個技術方案是：提供一種藥物組合物，該藥物組合物包括：如前述的方法制備得到的噬菌體制劑；藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中的至少一種。

為解決上述技術問題，本申請采用的又一個技術方案是：提供一種如前述的方法制備肺炎克雷伯菌噬菌體制劑、鮑曼不動桿菌噬菌體制劑、銅綠假單胞菌噬菌體制劑中的應用。

本申請的有益效果是：區別于現有技術的情況，本申請能夠快速、低成本、高效地去除噬菌體制劑中的內毒素，其中，切向流系統具有高通量、可反復使用的優點，采用切向流系統過濾結合切向流系統濃縮，可以實現快速、高效、低成本的噬菌體混合培養液的滲濾和噬菌體原始液的濃縮；此外，通過氯化銫密度梯度離心結合透析去除氯化銫，可高效、快速地獲得高純度的噬菌體制劑。

附圖說明

為了更清楚地說明本申請實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本申請的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。其中：

圖1為本申請噬菌體制劑的制備方法一實施例的流程示意圖；

圖2為圖1中步驟S10的流程示意圖；

圖3為圖1中步驟S20的流程示意圖；

圖4為圖1中步驟S30的流程示意圖；

圖5為圖1中步驟S40的流程示意圖；

圖6為本申請噬菌體制劑的制備方法另一實施例的流程示意圖；

圖7為本申請噬菌體制劑的制備方法又一實施例的流程示意圖；

圖8a是實施例3中首劑后1小時、6小時、24小時、72小時檢測小鼠血液中炎性指標TNF-α的結果；