[發明專利]一種基于蚯蚓體腔液的生物傳感器及其在檢測四環素類抗生素中的應用和檢測方法

在審

• 申請號: 202110605032.4
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113324963A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 霍峰;蔣志;劉冠輝;王曦妮;王顯祥
• 申請（專利權）人: 四川中科微納科技有限公司;四川農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

1.一種蚯蚓體腔液在四環素類抗生素檢測中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述蚯蚓體腔液為熒光物質，且會在四環素類抗生素的作用下發生猝滅。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述四環素類抗生素為四環素、金霉素、土霉素或強力霉素。

4.一種蚯蚓體腔液的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將10～20％乙醇、0.01～0.1MPBS緩沖液和2.0～3.0g/L的EDTA混合，配制得到刺激液；

(2)將蚯蚓稱重洗滌擦干后，置于刺激液中，收集蚯蚓排出的體腔液并于-80℃冷凍保存備用。

5.一種用于四環素類抗生素檢測的生物傳感器，其特征在于，其是基于蚯蚓體腔液制備而成。

6.一種通過蚯蚓體腔液檢測四環素類抗生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將待檢樣品預處理，以8000～10000r/min離心后收集上清液，然后加入四環素類抗生素溶液；

(2)將權4或權5的蚯蚓體腔液以8000～10000r/min離心10～15min，收集上清液，然后將其與步驟(1)加標后的溶液等體積混合，孵育1～5min后，于370nm的激發條件下測定熒光光譜，記錄位于520nm處的熒光強度，并計算相對熒光強度；

(3)然后根據構建的標準曲線和線性方程，即可計算出待檢樣品中四環素類抗生素的加標回收濃度。

7.根據權利要求6所述的通過蚯蚓體腔液檢測四環素類抗生素的方法，其特征在于，所述標準曲線的構建過程如下：

(1)配置濃度為250μmol/L的四環素類抗生素標準溶液，用pH值為7.2～7.4的PBS緩沖液和雙蒸水將四環素類抗生素稀釋為0.5μmol/L、0.75μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L，以及75μmol/L；

(2)取出-80℃冷凍備用的蚯蚓體腔液，10000r/min的條件下離心10min，隨后收集上層溶液作為蚯蚓體腔液檢測液；

(3)分別將1mL上述不同濃度的四環素類抗生素溶液與1mL蚯蚓體腔液檢測液混合搖勻；

(4)選擇在370nm的激發下測定蚯蚓體腔液檢測液和不同濃度四環素類抗生素反應后的熒光光譜，記錄位于520nm處的熒光強度，根據計算加入的四環素類抗生素濃度的含量和相對應光強度變化值之間的關系建立四環素類抗生素檢測的標準曲線，得到蚯蚓熒光檢測四環素類抗生素體系的檢測范圍及線性方程。