[發(fā)明專(zhuān)利]一種無(wú)刺花椒組培苗的切割方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110603511.2
• 申請(qǐng)日: 2020-03-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113331055A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳澤雄;唐寧;婁娟;許鋒;劉霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 重慶文理學(xué)院;長(zhǎng)江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 戴嵩瑋

1.一種無(wú)刺花椒組培苗的切割方法，其特征在于，包括以下步驟：將經(jīng)過(guò)初代培養(yǎng)的無(wú)刺花椒萌芽莖段置于超凈工作臺(tái)上的無(wú)菌接種盤(pán)中，用滅菌的工具將無(wú)刺花椒萌芽莖段的基部即浸入培養(yǎng)基的一端的組織切除，露出新鮮組織，然后切成1～3片葉莖段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的切割方法，其特征在于，所述無(wú)刺花椒萌芽莖段在切割過(guò)程中，頂芽切成1～2cm長(zhǎng)，帶2～4片葉的莖段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的切割方法，其特征在于，所述無(wú)刺花椒萌芽莖段在切割過(guò)程中，除靠近培養(yǎng)基水漬狀、黃花的老葉片需切除外，其余所有葉片均需保留。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的切割方法，其特征在于，所述初代培養(yǎng)，包括：將無(wú)刺花椒萌芽莖段置于培養(yǎng)基中，并在黑暗環(huán)境中培養(yǎng)5～9天，再置于光照強(qiáng)度為900～1100lux條件下培養(yǎng)6～8天，然后將光照強(qiáng)度增加至1900～2100lux培養(yǎng)12～16天，直至無(wú)刺花椒萌芽莖段生長(zhǎng)至高度3～4cm，3～4個(gè)節(jié)間，且腋芽萌發(fā)數(shù)量不少于2個(gè)；所述初代培養(yǎng)過(guò)程中的培養(yǎng)基成分組成為：MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、玉米素(ZT)為2.0mg·L^-1、萘乙酸(NAA)為0.1mg·L^-1、卡拉膠為6.0g·L^-1、蔗糖為30g·L^-1和植物組培抗菌劑為(PPM)0.1％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的切割方法，其特征在于，所述繼代增殖培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：將經(jīng)過(guò)初代培養(yǎng)且利用權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述方法進(jìn)行切割后的進(jìn)行第二代培養(yǎng)：將切割好的莖段置于培養(yǎng)基中，并在黑暗環(huán)境中培養(yǎng)5～9天后，及時(shí)置于光照強(qiáng)度為900～1100lux條件下培養(yǎng)6～8天，然后將光照強(qiáng)度增加至1900～2100lux培養(yǎng)12～16天，直至莖段生長(zhǎng)至高度3～4cm，3～4個(gè)節(jié)間，且腋芽萌發(fā)數(shù)量不少于2個(gè)；

所述第二代培養(yǎng)過(guò)程中的培養(yǎng)基成分組成為：MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、玉米素(ZT)為2.0mg·L^-1、萘乙酸(NAA)為0.1mg·L^-1、卡拉膠為6.0g·L^-1、蔗糖為30g·L^-1和植物組培抗菌劑為(PPM)0.1％；

重復(fù)切割和第二代培養(yǎng)進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，直至培養(yǎng)基中PPM用量為0時(shí)結(jié)束，且繼代增殖培養(yǎng)代數(shù)不少于4代；

所述繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分組成為：MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、ZT為1.0～2.0mg·L^-1、NAA為0.1mg·L^-1、卡拉膠為6.0g·L^-1、蔗糖30g·L^-1和PPM為0～0.05％；

所述繼代增殖培養(yǎng)代數(shù)每增加1～2次，PPM用量降低0.01％。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的切割方法，其特征在于，在重復(fù)切割和第二代培養(yǎng)時(shí)，第三代培養(yǎng)和第四代培養(yǎng)的培養(yǎng)基成分中ZT用量均為2.0mg·L^-1。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的切割方法，其特征在于，所述繼代增殖培養(yǎng)代數(shù)超過(guò)4代后，培養(yǎng)基成分中ZT用量需根據(jù)增殖的腋芽莖段節(jié)間長(zhǎng)度和腋芽數(shù)量進(jìn)行調(diào)整，當(dāng)腋芽莖段密集且腋芽叢生時(shí)，ZT用量為1.0～1.25mg·L^-1，當(dāng)腋芽莖段節(jié)間長(zhǎng)且腋芽萌發(fā)較少時(shí)，ZT用量為1.25～1.5mg·L^-1。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的切割方法，其特征在于，所述繼代增殖培養(yǎng)過(guò)程中，PPM用量隨著繼代次數(shù)的增加每次減少0.01％。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的切割方法，其特征在于，在整個(gè)繼代增殖培養(yǎng)期間，每天的光照培養(yǎng)時(shí)間為10h，溫度為23～27℃。