[發(fā)明專利]一種調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的方法

在審

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• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號(hào): CN113897337A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 錢政江;李燕嬌;李翔;李洪超;楊海洋
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/12;C12N15/861;C12N15/113;A61K31/7088;A61P29/00;A61P9/00;A61P31/04;A61P19/02;A61P1/00;A61P25/00;A61P35/00;A61P9/10
• 代理公司: 深圳市威世博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44280
• 代理人: 黎堅(jiān)怡

1.一種調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的方法，其特征在于，所述方法包括采用過表達(dá)HIMF基因感染巨噬細(xì)胞、或者采用特異性siRNA敲減或整體敲除巨噬細(xì)胞中HIMF基因的步驟。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用過表達(dá)HIMF基因感染巨噬細(xì)胞的步驟，包括：

構(gòu)建過表達(dá)HIMF基因的腺病毒載體；

將所述巨噬細(xì)胞接種于多孔板中；

待所述巨噬細(xì)胞的細(xì)胞密度達(dá)預(yù)設(shè)值時(shí)，用所述過表達(dá)HIMF基因的腺病毒載體感染所述巨噬細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述巨噬細(xì)胞包括RAW264.7和/或骨髓來源巨噬細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，將所述巨噬細(xì)胞接種于多孔板中的步驟之前，所述方法還包括：

分離和培養(yǎng)骨髓來源巨噬細(xì)胞：將小鼠脫頸處死，依次浸泡于兩個(gè)75％酒精燒杯中；用剪刀剪斷大腿，分離股骨和脛骨，剔除皮肉后置于培養(yǎng)基中；剪斷股骨和脛骨的關(guān)節(jié)面，暴露骨髓腔，用注射器沖洗骨髓腔，移液槍吹散細(xì)胞；細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞篩過濾后，收集細(xì)胞懸浮液至離心管中；離心，棄上清，用含有巨噬細(xì)胞集落刺激因子(MCSF)的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種于多孔板中進(jìn)行培養(yǎng)；3天后添加含有MCSF的培養(yǎng)基，再培養(yǎng)3天后獲得的成熟的所述骨髓來源巨噬細(xì)胞。

5.一種調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括過表達(dá)HIMF基因的腺病毒載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中的任意一種或至少兩種的組合。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述過表達(dá)HIMF基因的腺病毒載體的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

SEQ.ID.NO.1：

AAATGTGGGCGGCCAAAGTGTATTGAAAGTGTTTACTCCATTGGGATGTGCTTGTATATATTCAGGGCCCCTAGGTCAGTAATCTCATAGTGTATTAAAAAGCATCTCATCTGGCAAGGTCCTGGAAACTTTTCTGAGATTCTGGTGAGTCAGTCAGCTCTGTAGGATCCTCTCTTCCTCCTAAACATCTGGAATAATTATAGTAGCATTTCTCCTGATGTTCTCACCCTCTCCTCTACCTCACATCCATCCTAGAGCTCATTGATCTCATCTTCTCTGCTCTTCCCCTCCAGCCCCAGGACACTGACTTTCAACAGGATGAAGACTGCAACCTGTTCCCTTCTCATCTGCGTCTTCCTTCTCCAGCTGATGGTCCCAGTGAATACTGATGGAACCTTAGACATTATTGGGAAGAAAAAGGTCAAGGAACTTCTAGCCCATCAAGGTATGAGATGAGTAGGAAAAATCATAGCTTAATCCTTGCTGATGATGACTGTACATAAGACCTAAAATCTCTTGTATCCTGGTCTAAGCTCTTAGTCCCCGTTATCCCTGCCTTCCTGACCAGGGCTTCCTTCAGCACCCTACACTTTTGAACTCTTGGATAACAGCTTAATGTTGTTGATGAAGATGAAGAAAAAGGATAGAACCTGTAATTTATAAACATATCACAAAACAAACATATTAAGCATTCAGTTAGTTCATTCAATTTTCACAGGCACTTTATGAGTTAAGTACAACTATTACTTTTTCTTTACAAATGAGGAAGCTAGATCTTAAAAGTTAGCAAGGGGACTACTTATGGAACCAGTGACACCCCCAAGATAGAGGAAGACTTATAAAAGAATTGTGAGAAAGATCATGGGCTATATCACCTTTCTCTCTTACTCAGATAACTATCCCTCTGCTGTAAGGAAGACCCTCTCATGCACTAATGTCAAGTCTATGAGCAAATGGGCCTCCTGCCCTGCTGGTGAGTAATTCCTTAAGGAGATTTTGTGAATACAGTGGGTTCCTCTGTGTCCTCCCTCATCAATCTCTTAATGCCATCTTTCTCCTAAGTCAGGTTTGTACTGCAATGGAACTGAGCTACAGTTCCAGATGTGCAGACACCACTTCCTGATTTTCAGCTCTCCAATGATGCTATTGAGGGACTTTTGGTTTCTGCCTTTCATGTCACTTCTTCCTTTATGCCAGCCCTTCCTGTCCCTCAAGTGTCTGGTAATGGATATATATGGCCTTCATTTCTTCCATAACCTTTTCCCTTGTATTGTGGGCAGCAGGAGTCAGAACAGGGGTGAATTTGCTATTAATTGAAAGACAGTGAAACTCCACCTTCCAAATCCTCCAGTTTAAGTAACTTTTGCACTTGGTTTGTTTGAAAAGAACTGTGGAATTTGAATAGCTTTTTGTTTTGCAAAATAGAGCAACTCATGTGCTTTCTAAGAAGGAAGAACAGTTAGGGACCTTCCCTCCCT TACAGTCCAAGGGCTCTGACATATCTGTCTCACATAACTATGCAGGGATGACTGCTACTGGTTGTTCTTGTGGCTTTGCCTGTGGATCTTGGGAAATCCAGAATGAAAATATTTGCAACTGCCTGTGCTTAATCGTTGACTGGGCCTATGCCCGCTGCTGCCAACTGTCCTAAGAATGGAGAGGCACAGAACTCAGCTTTGATATGATGAGTCTAACAAAACTGCAATCTCAACTTGGAAATCTGACTCATGCGCATTTGATGTATTCATATTGCCCATTAACCCCGCTTCTTGAAAAAATAAAGACAAATTTACATCTTTCTA。