[發(fā)明專利]一種Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110600915.6
• 申請日: 2020-08-20
• 公開（公告）號: CN113136405A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡勇;張苗苗;洪丹;胡迅
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市瑞吉生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C07H21/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發(fā)明提供了一種Cap2結(jié)構(gòu)5'帽子類似物及其制備方法和應(yīng)用，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，所述Cap2結(jié)構(gòu)5'帽子類似物的分子式為m7G(5')ppp(5')(2'OMeU)p(2'OMeC)。本發(fā)明提供的Cap2結(jié)構(gòu)5'帽子類似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻譯效率。

本申請是申請日為2020年08月20日、申請?zhí)枮?02010842263.2、發(fā)明名稱為《一種Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物及其制備方法》的分案申請，申請人深圳市瑞吉生物科技有限公司。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物及其制備方法。

背景技術(shù)

翻譯效率和免疫原性是mRNA藥物行使功能的兩大關(guān)鍵因素。自體免疫蛋白如RIG-I和IFIT識別異常加帽的mRNA，降低了外源mRNA在細胞內(nèi)的活性和半衰期，使得mRNA藥物在體內(nèi)難以發(fā)揮作用。因此，優(yōu)化mRNA帽結(jié)構(gòu)對于提高mRNA的生物活性和降低免疫原性是至關(guān)重要的。

目前在體外合成帶帽的mRNA有兩種方法，第一種是mRNA轉(zhuǎn)錄后使用牛痘病毒加帽酶對其進行加帽，產(chǎn)生帶Cap 0或Cap 1的RNA，這種加帽方法很高效，但是產(chǎn)量不穩(wěn)定，價格也很昂貴。此外酶促加帽法不能產(chǎn)生Cap 2和m6Am的帽子。第二種方法是轉(zhuǎn)錄過程中加入過量的帽結(jié)構(gòu)類似物來進行加帽。截至目前，最常用的帽結(jié)構(gòu)類似物是ARCA，使用ARCA可產(chǎn)生具有免疫原性的Cap 0，但是加帽效率只有70％。該方法的產(chǎn)量也比較低，每毫升轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系最多制備1.5mg RNA，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物具有很高的免疫原性。另一種叫做Cleancap的共轉(zhuǎn)錄加帽的方法也被廣泛采用。Cleancap屬于Cap 1，與ARCA使用二聚體(m7GpppG)啟動T7轉(zhuǎn)錄不同，CleanCap使用三聚體(m7GpppAmG)啟動T7轉(zhuǎn)錄。該方法的產(chǎn)量比較高，每毫升轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系制備4mg加帽的RNA，加帽效率可達90％，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的免疫原性低于ARCA。

基于現(xiàn)有mRNA合成體系中的帽結(jié)構(gòu)類似物的加帽率低，單位合成體積內(nèi)mRNA產(chǎn)量低以及免疫原性高等缺點，從而研發(fā)了Cap2帽結(jié)構(gòu)類似物，既彌補了以上應(yīng)用上的缺點，又大大提升了蛋白翻譯效率。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物及其制備方法，本發(fā)明提供的Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻譯效率。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物，所述Cap2結(jié)構(gòu)5′帽子類似物的分子式選自以下任一種；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeC)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeU)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeC)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeU)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeC)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeC)；