[發明專利]一種基于RNA干擾技術的對蝦免疫增強劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110598646.4
• 申請日: 2021-05-31
• 公開（公告）號: CN113209126B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 左洪亮;徐曉鵬;翁可佳;何建國;翁少萍;朱志明
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P37/04;A61P31/04
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發明公開了一種基于RNA干擾技術的對蝦免疫增強劑及其制備方法與應用，其通過dsRNA特異性干擾凡納濱對蝦LvFtz?F1β2基因的表達，激活對蝦JAK/STAT信號通路，增強對蝦免疫力，提高對蝦對病原的抗性。該對蝦免疫增強劑被對蝦取食后，隨著飼料的被消化，dsRNA隨即被腸道吸收，進入腸道的dsRNA會在腸道中發揮功能，并隨著對蝦的開放式循環系統運輸至其它組織器官，最終造成全身性的RNA干擾。而且，其制備成本低，易在工廠化養殖體系中大規模使用，特異性強，安全性高，對推動對蝦養殖業的發展有重要意義。

技術領域

本發明屬于水產養殖領域，具體涉及一種基于RNA干擾技術的對蝦免疫增強劑及其制備方法與應用。

背景技術

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)俗稱南美白對蝦，隸屬于節肢動物門，甲殼綱，十足目，對蝦科，濱對蝦屬，由于其生長速度快，含肉率高，蛋白質豐富，抗病抗逆能力強等特點，是世界范圍內對蝦養殖的主要品種。隨著全球經濟水平上漲，人們生活水平和消費能力隨之升級，市場對對蝦需求量日益增長。從野生環境捕撈對蝦已經滿足不了市場對健康對蝦的需求，在龐大的市場需求的推動下，對蝦養殖業得到了蓬勃發展。然而，伴隨著對蝦養殖規模的擴大和養殖密度的提高，對蝦病害日益嚴重，高密度養殖模式下，病害一旦發生便會迅速蔓延，造成巨大的經濟損失。主要危害全球對蝦養殖業的病原主要有病毒、細菌、真菌和寄生蟲等，其中危害最大的是病毒和細菌。對蝦病毒性病原最主要的是白斑綜合癥病毒(White spot syndrome virus，WSSV)，其能夠通過水體傳播，一旦感染便會迅速傳播，如不進行人工干預，短時間內可造成對蝦死率亡達100％。對蝦細菌性病原主要是弧菌，如：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈氏弧菌(Vibrio harveyi)和創傷弧菌(Vibrio vunificus)，同樣傳播迅速，能夠造成對蝦出現急性肝胰腺壞死綜合癥，進而出現大規模死亡。不僅如此，已知病原物的突變、新病原物的出現以及環境惡化所帶來的巨大影響等都會對對蝦養殖業帶來巨大的壓力和挑戰，因此，如何利用現代生物學技術，開展對蝦免疫機制和病原研究，開發新型對蝦抗病制劑，對于提高對蝦養殖經濟收益，推動對蝦養殖業的發展有重要意義。

相關技術中，還未出現消滅對蝦病原微生物行之有效的藥物。常規用于控制對蝦病害的主要為抗生素，但抗生素會在蝦體內殘留，嚴重威脅到人類的健康，因此抗生素在在對蝦養殖過程中的使用受到嚴格控制。而對蝦免疫增強劑主要是通過提高對蝦非特異免疫能力，增強其抗病性，根據其成份可分為化學合成物、多糖、微生物、中草藥制劑、細菌提取物、維生素和多肽等。但這些制劑都存在著很多實際應用上的問題，如對于微生態制劑，其需要在對蝦養殖養前進行水環境微生物培養，且培養時間較長，無法及時改變水環境中病原與微生物的相互關系。而對于化學合成物、多糖、多肽和細菌提取物，其往往成本高，且其在使用過程中會受到不同分子結構、不同添加劑量、不同飼喂方式以及環境條件等影響，可能產生免疫增強效果低或過度免疫造成免疫疲勞等現象。中草藥制劑則存在成份復雜，每種成份在病原和宿主之間的作用機制不清楚的問題，尤其是對于復方中草藥，其具體含量配比、提取工藝、藥代動力學情況都需要花費大量人力物力。常規的免疫增強劑，如維生素，通常采用注射法、浸泡法和口服法施用，注射法容易造成對蝦的應激及死亡，操作耗時長，操作難度大；浸泡法對于藥劑吸收率要求高，蝦的體表接觸不如肌肉和血液吸收快，從而對于藥物吸收不理想；口服法雖然方便，但藥劑添加到飼料中，投放至水中容易擴散，造成藥劑的浪費，也容易污染水體。而且，即便采用包膜技術對飼料進行包膜，其也會存在適口性問題，容易導致動物對飼料的攝入量減少。