[發明專利]一種促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法、緩釋微球及其應用

在審

• 申請號: 202110595245.3
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113368062A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 黃文華;吳耀彬;鄭蔚晗
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: A61K9/16
• 分類號: A61K9/16;A61K35/28;A61K47/42;A61K47/34;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 趙蕊紅

1.一種促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：步驟S1，制備獲取微球溶液；

步驟S2，制備獲取微流控的流動相溶液；

步驟S3，提取間充質干細胞分離獲取外泌體溶液，經過凈化處理后與步驟S1中所制備的微球溶液進行混合配置獲取微流控的分散相溶液；

步驟S4，通過將步驟S2取得的流動相溶液以及步驟S3取得的分散相溶液分別通過微流控芯片制備取得促軟骨修復外泌體緩釋微球。

2.根據權利要求1所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：所述步驟S1包含有；

步驟S1-1，分別稱取甲基丙烯酸酰化明膠和聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯，各加入到預熱至T溫度的雙蒸水中分散，獲得甲基丙烯酸酰化明膠溶液和聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯溶液；

步驟S1-2，以摩爾等份計，A1等份的甲基丙烯酸酰化明膠溶液和A2等份的聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯溶液充分攪拌至均勻后，獲得微球混合溶液；

步驟S1-3，將微球混合溶液經過納米濾膜過濾除菌后靜置獲取微球溶液。

3.根據權利要求2所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：所述步驟S2具體為；以體積等份計，將B1體積的司班80加入到B2體積的礦物油中攪拌均勻，靜置獲取流動相溶液。

4.根據權利要求3所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：所述步驟S3包含有；

步驟S3-1，選取處于對數生長期的間充質干細胞，當間充質干細胞生長至C1融合度時，更換含無外泌體血清的培養基，繼續培養H小時；

步驟S3-2，收集培養基中的細胞培養上清，采用差速離心法提取外泌體溶液；

步驟S3-3，將外泌體溶液經過納米濾膜過濾除菌后，與所述步驟S1中的微球溶液按照濃度度比為C3進行配置獲取分散相溶液。

5.根據權利要求4所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：所述步驟S4包含有；

步驟S4-1，將裝有分散相溶液、連續相溶液分別通過離心管連接注壓瓶蓋，

注壓瓶蓋氣路接頭一端分別連接至微流控壓力泵，注壓瓶蓋液路接頭一端連接微流控芯片的對應接口，確保注壓瓶蓋液路的毛細管下降至離心管底部與分散相溶液、連續相溶液充分接觸，打開紫外燈聚光于微流控芯片后段進行除菌處理；

步驟S4-2，通過調節流動相溶液相對壓力值、分散相溶液相對壓力值進行調控微球的粒徑大小，在壓力的作用下將分散相溶液與流動溶液相一同擠出；

步驟S4-3，用EP管于微流控芯片的溶液出口處盛接液滴，芯片滴出液滴中含有軟骨修復外泌體緩釋微球。

6.根據權利要求5所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法，其特征在于：所述納米濾膜為0.11-0.32μm濾膜；

C3為50～300μg/ml；T溫度為35-45℃；

將B1：B2為1：9；A1：A2為1：1；C1融合度為90～100％融合度；

T溫度為40℃；

所述納米濾膜為0.22μm濾膜；H為36-72小時；

分散相溶液相對壓力值為60～120，流動相溶液相對壓力值為80～140。

7.一種外泌體緩釋微球，其特征在于，根據權利要求1至6任意一項所述的促軟骨修復外泌體緩釋微球的微流控制備方法獲取。

8.根據權利要求7所述的外泌體緩釋微球，其特征在于：所述外泌體緩釋微球直徑為50～100um；

9.根據權利要求8所述的外泌體緩釋微球，其特征在于：所述外泌體緩釋微球包含有微球和外泌體，所述外泌體均勻分布于所述微球球內。

10.一種促軟骨修復外泌體緩釋微球的應用，其特征在于：所述促軟骨修復外泌體緩釋微球用于治療骨關節炎、降低炎癥因子造成的軟骨細胞損傷、促進軟骨組織的再生、改善骨關節炎關節腔內炎癥狀況、減少炎癥因子表達量、進而促進軟骨基質合成分泌至少一種。