[發明專利]一種雜交瘤細胞株及其分泌的2型短裸甲藻毒素單克隆抗體和應用

有效

• 申請號: 202110594728.1
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113185530B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 沈建忠;于雪芝;王戰輝;張西亞;張素霞;江海洋;溫凱;余文博;王紫怡
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07D493/22
• 分類號: C07D493/22;C07K14/765;C12N5/20;C07K16/14;G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 錢云

本發明涉及免疫學領域，尤其涉及一種雜交瘤細胞株及其分泌的2型短裸甲藻毒素單克隆抗體和應用。所述雜交瘤細胞株命名為BTX?2?18G6，由式I所示半抗原制備得到。本發明使用2型短裸甲藻毒素制備半抗原，進一步合成免疫原并免疫小鼠，經過細胞融合、篩選等技術制備得到一種能分泌識別短裸甲藻毒素的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株分泌單克隆抗體效率較高。分泌得到的單克隆抗體可以準確檢測短裸甲藻毒素，并且特異性較高，和黃曲霉B1、喹諾酮和氯霉素之間無交叉反應。

技術領域

本發明涉及免疫學領域，尤其涉及一種雜交瘤細胞株及其分泌的2型短裸甲藻毒素單克隆抗體和應用。

背景技術

赤潮是海水中某些微小的微型藻、原生動物或細菌在一定的環境條件下暴發性增殖或聚集在一起而引起水體變色的一種生態異?，F象。近年來，世界各地頻繁發生的赤潮，其中有一些是有毒赤潮，這些赤潮生物分泌的黏液，含有毒素，粘在魚、蝦、海洋貝類生物上。少量的毒素就會使魚中毒死亡，而貝類生物對這些毒素的忍受力度較高，并使這些毒素在貝類生物體內聚集，它們也無生態危害，可是當人們食用這些含有毒素的貝類后，毒素迅速被釋放，造成人類中毒，甚至死亡。

貝類毒素屬于天然毒素，不同于人工合成的毒素。目前，一些國家己經制定了貝類毒素的檢測標準，以最高允許限量(MPL)表示。美國、加拿大、日本及歐盟對冷藏鮮貝肉的MPL為0.8ng/g，對罐頭原料用貝肉中毒素限量，美國MPL為2ng/g，加拿大MPL為1.6ng/g。常見的貝類毒素分為麻痹性貝毒、腹瀉性貝毒、神經性貝毒、失憶性貝毒。其中，神經性貝毒可引起暈眩，瞳孔放大，發冷發熱，惡心，嘔吐及腹瀉，嚴重時會心律失常、窒息。除了攝食貝類之外，這種毒素也可通過海洋中的氣溶膠造成呼吸道中毒，致氣喘，干咳，流鼻涕及眼角膜炎，這種毒素的中毒癥狀在美國及美洲沿海出現過。神經性貝毒活性成分包括短裸甲藻毒素A(Brevetoxin A)，短裸甲藻毒素B(Brevetoxin，BTX)和半短裸甲藻毒素B(Hemibrevetoxins B)等，主要由短裸甲藻產生。其中，BTX-2是毒性最強的神經毒素，人類誤食含有BTX-2的貝類食物，會引起中毒甚至死亡。

目前已建立的BTX-2主要分析方法有生物活體毒性測定，該方法用小鼠(mouse，腹腔注射方式)和大鼠(rat，口服方式)作為實驗動物，雖然應用比較廣泛，但由于該方法自身缺陷及動物福利的原因，逐漸被替代；儀器分析方法，如色譜分析法，包括薄層色譜、液相色譜和液相色譜質譜聯用法，該方法對人員和儀器設備的要求較高，并且需要昂貴的標準品，不利于快速檢測，而以酶聯免疫為主的免疫法，具有快速、操作簡單、成本低高通量等特點，逐漸呈現出強大的生命力。

在免疫分析方法中，識別原件十分重要，目前文獻報道的BTX-2的分子識別原件主要有核酸適配體和抗體。Shimaa Eissa et al等2015年采用SELEX法篩選出7條核酸適配體序列，其中，BT10對BTX-2的親和力最強，并且利用該核酸適配體建立了電化學阻抗法，該方法具有較高的靈敏度，它的檢測限是0.106ng/mL。Rui Yun Tian等2016年也采用SELEX技術報道了BTX-2的核酸適配體，并且建立了ELISA分析方法，該方法的IC₅₀是73.81ng/mL。雖然，核酸適配體的使用也可以建立靈敏度高的免疫學分析方法，可是由于核酸適配體的靈敏度不夠，結構不穩定，基于核酸適配體的免疫分析仍然不成熟?？贵w仍是免疫學分析方法的制約性因素，因此制備BTX-2抗體十分重要。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明提供一種雜交瘤細胞株及其分泌的2型短裸甲藻毒素單克隆抗體和應用。所述雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體可以準確地對短裸甲藻毒素進行檢測。

第一方面，本發明提供一種半抗原，所述半抗原包括如式I所示結構：

本發明進一步提供由所述半抗原和載體蛋白BSA反應得到的抗原。