[發明專利]黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202110594331.2
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113607959B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 張奇;李培武;姜俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒，其特征在于：包括孔底包被有黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的納米抗體或單克隆抗體的酶標板、黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的多克隆抗體、起標準物質作用的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01純品溶液、察氏培養基或其他適宜產毒黃曲霉菌生長的培養基、與黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01多克隆抗體發生結合反應的辣根過氧化物酶標記抗體、ELISA顯色液與終止液、樣品稀釋液；

所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子是指AFT-YJFZ01肽，其氨基酸序列如SEQ?IDNO.1?所示。

2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的孔底包被有黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的納米抗體或單克隆抗體的酶標板，是通過如下方法制備獲得：將上述AFT-YJFZ01的納米抗體或單克隆抗體溶解在ELISA包被緩沖液中，形成0.2-8.0?μg/mL的包被液，再加入至酶標板中，4?℃放置過夜或者37?℃放置不少于2?h后，去除上述酶標板中包被液，再用ELISA常規洗液洗滌酶標板；然后加入ELISA常規封閉液，放置室溫或37?℃封閉不少于1?h后，再棄去封閉液，再用ELISA常規洗液洗滌酶標板。

3.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒，其特征在于：黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的多克隆抗體為黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01兔源多克隆抗體，所述的辣根過氧化物酶標記抗體為辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體。

4.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的ELISA顯色液是指ELISA常規的雙氧水與TMB顯色液；

所述的終止液是指ELISA常規的顯色終止液：2mol/L硫酸水溶液。

5.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的樣品稀釋液是指含有0.1%山梨醇和0.1%糖的0.01?mol/L?磷酸鹽緩沖液。

6.權利要求1所述的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子免疫快速檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

用試劑盒中的察氏培養基適宜產毒黃曲霉菌生長的培養基培養并制備待鑒別菌株或待鑒別樣品的待測液；

將待鑒別菌株或待鑒別樣品的待測液用樣品稀釋液稀釋，將稀釋后待鑒別菌株的待測液或待鑒別樣品的待測液，以每孔100-200?μL加入到試劑盒中的酶標板孔中，放置室溫或37?℃反應不少于1?h后，棄去反應后液體，洗滌酶標板;

然后加入試劑盒中AFT-YJFZ01多克隆抗體，每孔加入100-200μL，放置室溫或37?℃反應不少于1?h后，棄去液體，再洗滌酶標板；

然后每孔加入試劑盒中的辣根過氧化物酶標記抗體100-200μL，放置室溫或37?℃反應不少于1?h后，棄去液體，再洗滌酶標板，

然后先后加入試劑盒中的ELISA顯色液、終止液，最后通過酶標儀讀取并計算待測樣品中AFT-YJFZ01的濃度。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，用系列濃度的起標準物質作用的黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01純品溶液，替換待測液，用于制作標準曲線，計算得到待測樣品中AFT-YJFZ01的濃度。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，還包括：檢測結果評判：根據酶標儀結果，獲得單位體積黃曲霉待測液中黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的含量，分析待鑒別菌株的黃曲霉毒素產毒力，待鑒別菌株中黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01濃度越高，則說明鑒別菌株產黃曲霉毒素能力即產毒力越強；

根據酶標儀結果，獲得單位體積待鑒別樣品液中黃曲霉毒素產毒菌產毒力指示分子AFT-YJFZ01的含量，判定待鑒別樣品中是否含有黃曲霉毒素的強產毒力菌株。