[發明專利]一種小RNA結合序列的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統在審
| 申請號： | 202110593753.8 | 申請日： | 2021-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN113293172A | 公開（公告）日： | 2021-08-24 |
| 發明（設計）人： | 康振;唐瑤;王陽;徐雅晴;孫雨倩 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/75 | 分類號： | C12N15/75;C12N15/90;C12N15/65;C12N15/31;C12N15/113;C12N15/56;C12P19/26 |
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| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 rna 結合 序列 枯草 芽孢 桿菌 轉錄 調控 系統 | ||
1.一種枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，按如下方法構建而成：
敲除枯草芽孢桿菌基因組上的內源性毒素-抗毒素系統bsrE/SR5基因序列從基因組上敲除，
將不同長度的毒素基因bsrE的操縱區序列OPR5整合至基因組上不同目的基因終止密碼子TAA之后，
構建抗毒素基因表達載體，將表達載體轉化至枯草芽孢桿菌。
2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，所述目標基因包括內源基因或外源基因。
3.根據權利要求1或2所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，所述目的基因包括綠色熒光蛋白基因，或與目的產物合成代謝途徑相關的基因。
4.根據權利要求3所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，所述目的產物包括透明質酸、軟骨素或肝素。
5.根據權利要求1～4任一所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，所述毒素基因操縱區OPR5的核苷酸序列及其截短序列如SEQ ID NO.2所示。
6.根據權利要求1～5任一所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統，其特征在于，所述表達載體為穿梭質粒pP43-NMK。
7.一種調控目的基因表達的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)敲除枯草芽孢桿菌基因組上的內源性毒素-抗毒素系統bsrE/SR5基因序列從基因組上敲除，
(2)將不同長度的毒素基因bsrE的操縱區序列OPR5整合至基因組上不同目的基因終止密碼子TAA之后，
(3)構建抗毒素基因表達載體，將表達載體轉化至枯草芽孢桿菌中。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，抗毒素基因SR5的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。
9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述目的基因包括綠色熒光蛋白基因，或與目的產物合成代謝途徑相關的基因。
10.權利要求1～6任一所述的枯草芽孢桿菌轉錄后調控系統在發酵生產透明質酸、軟骨素或肝素中的應用。
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