[發明專利]一種回收油包水液滴中內容物的方法及液滴生成裝置

在審

• 申請號: 202110593330.6
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN115400809A
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: 王詩雨;劉亞;呂孟華;高開;劉楊;陳琳喆
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院
• 主分類號: B01L3/02
• 分類號: B01L3/02
• 代理公司: 北京匯知杰知識產權代理有限公司 11587
• 代理人: 楊巍;柴春玲

本發明屬于生物技術領域，公開了一種回收油包水液滴中內容物的方法及液滴生成裝置。所述方法包括：1)向油包水液滴中加入破乳劑，然后靜置；2)將靜置后的液體最下層的油相移出；3)向所得的液體中再次加入破乳劑，然后靜置；4)將所得的液體進行低速離心，所述液體形成上下兩層，中間有界面；5)收集所述界面之上包含所述內容物的液體，不觸及所述中間的界面。與現有技術中已有方法相比，本發明的方法操作時間近似，但是細胞回收率顯著提高；細胞活率較高；減少破乳劑污染樣品的可能。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體而言，本發明提供了一種回收油包水液滴中內容物的方法及液滴生成裝置。

背景技術

在微流控技術應用中，為了實現物理上的隔離，油包水液滴是常用的結構。但是，為了回收液滴內容物，需要打破油膜表面張力。對此，本領域存在兩種技術路線，第一種技術路線是加入化學破乳劑打破液滴，第二種技術路線是使用物理方法。在第一種技術路線中，通過加入破乳劑，替換油膜內的表面活性劑，破壞油膜穩定結構，促使油膜相互融合，最終實現油水分離。但是，該技術路線會受溫度、破乳劑類型和破乳時間等影響，同時破乳劑對細胞活力也有影響。因此，該技術路線在使用時需要有針對性地建立技術方法。第二種技術路線包括采用去靜電裝置、真空抽吸等。但是，該技術路線在使用時需要考慮目標回收物的性質，對細胞等脆弱、易變性等物質效果不好。

已有方法采用1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇為破乳劑回收液滴中的細胞。在具體應用中，先向液滴中加入DMEM/F12培養基和1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇后進行混勻，然后通過在4攝氏度、700g下離心實現相分離。此方法的缺點有：細胞得率在40～60％之間，總回收率低；由于采用700g離心，細胞沉積在線分離界面，細胞回收難度大；當細胞懸浮液中存在Ficoll等試劑調節細胞懸浮液密度時，已有技術難實現相分離。

發明內容

為了穩定和提高細胞回收率，并且在回收過程中保持細胞的活性和降低破乳劑對后續實驗的影響，本發明提出了采用化學破乳劑來實現油包液滴內細胞或其他內容物的回收的方法。

因此，在一方面，本發明提供了一種回收油包水液滴中內容物的方法，所述方法包括：

1)向油包水液滴中加入破乳劑，然后靜置；

2)將靜置后的液體最下層的油相移出；

3)向所得的液體中再次加入所述破乳劑，然后靜置；

4)將所得的液體進行低速離心，優選30g-100g，更優選40g-70g，最優選50g，所述液體形成上下兩層，中間有界面；

5)收集所述界面之上包含所述內容物的液體，不觸及所述中間的界面。

在一個實施方案中，所述方法還包括一次或多次的6)：向所述界面上方的剩余液體中加入水性溶液，再次收集所述界面之上包含所述內容物的液體。

在一個實施方案中，所述油包水液滴中內容物是細胞，所述方法進一步包括，從包含所述內容物的液體中回收所述細胞，例如通過以500g離心10分鐘。

在一個實施方案中，所述水性溶液為細胞培養液。

在一個實施方案中，在1中)所述油包水液滴位于上層，液滴生成油位于下層。

在一個實施方案中，所述方法還包括，在1)中加入破乳劑之前，除去部分的下層液滴生成油。

在一個實施方案中，所述油包水液滴使用液滴生成裝置生成，優選使用微流控液滴生成裝置。

在一個實施方案中，所述破乳劑選自單寧基混合物、乙氧基化或環氧化的PAG、氧烷基化的聚(亞烷基)聚(胺)、聚(醚)聚(氨酯)和辛醇類，優選為辛醇類，更優選為正辛醇、異辛醇、丁辛醇、1H,1H,8H-全氟-1-辛醇或1H,1H,2H,2H-全氟-1-辛醇。