[發明專利]一種鋯離子介導的納米傳感器及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110592543.7
• 申請日: 2021-05-28
• 公開（公告）號: CN113403366A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 張春陽;李玥穎;劉倩;崔琳
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/68;C12N15/11;G01N33/573
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

1.一種QD-捕獲探針納米結構，其特征是，所述納米結構包括單量子點QD和捕獲探針，鏈霉親和素修飾在單量子點QD表面，磷酸基團和生物素各修飾在捕獲探針的兩端；所述捕獲探針利用生物素-鏈霉親和素自組裝到單量子點QD表面。

2.如權利要求1所述的一種QD-捕獲探針納米結構，其特征是，經過修飾的捕獲探針為5’P-TTT TTT TTT T-biotin。

3.一種PKA和/或PNK檢測用試劑盒，其特征是，所述試劑盒包括權利要求1或2所述的一種QD-捕獲探針納米結構和鋯離子Zr⁴⁺。

4.如權利要求3所述的一種PKA和/或PNK檢測用試劑盒，其特征是，還包括Cy5修飾的探針；進一步地，所述探針包括多肽探針和/或DNA探針；或，所述試劑盒還包括腺苷5′-三磷酸和PKA和/或PNK反應緩沖液。

5.一種鋯離子介導的納米傳感器，其特征是，所述納米傳感器由內而外依次為權利要求1所述的一種QD-捕獲探針納米結構、鋯離子Zr⁴⁺和Cy5修飾的探針，構建QD-Zr⁴⁺-Cy5納米結構。

6.如權利要求5所述的一種鋯離子介導的納米傳感器，其特征是，所述探針包括多肽探針和/或DNA探針。

7.如權利要求6所述的一種鋯離子介導的納米傳感器，其特征是，所述多肽探針為含有PKA識別位點的多肽探針，在探針的羧基端標記了Cy5熒光基團；進一步地，所述多肽探針的序列為Cy5-(COOH)-KLRRASL-(NH₂)；進一步地，所述識別位點為絲氨酸；或，所述DNA探針的序列為5’-GTT GAG C-Cy5-3’。

8.一種鋯離子介導的納米傳感器的制備方法，其特征是，所述制備方法包括QD-捕獲探針納米結構的制備和QD-Zr⁴⁺-Cy5納米結構的制備；進一步地，所述QD-捕獲探針納米結構的制備方法包括將捕獲探針、單量子點QD和10×QD緩沖液混合后避光孵育；進一步地，所述孵育時間為10-30min，優選的，為20min；

或，所述QD-Zr⁴⁺-Cy5納米結構的制備包括：將探針、ATP、PKA和/或PNK反應緩沖液、PKA和/或PNK反應溶液混合后，在30-45℃下反應1-4h，然后，在55-75℃下孵育。

9.一種PKA和/或PNK抑制劑的篩選方法，其特征是，所述方法包括將模型抑制劑和權利要求5-7任一項所述的一種鋯離子介導的納米傳感器共同反應；進一步地，所述模型抑制劑為H-89模型抑制劑和/或二磷酸腺苷和硫酸銨。

10.權利要求1或2所述的一種QD-捕獲探針納米結構和/或權利要求3或4所述的一種PKA和/或PNK檢測用試劑盒和/或權利要求5-7任一項所述的一種鋯離子介導的納米傳感器和/或權利要求8所述的一種鋯離子介導的納米傳感器的制備方法在PKA和/或PNK活性檢測中的應用。