[發明專利]多種草魚重組細胞因子及其制備方法和在協同增強草魚免疫功能中的應用有效
| 申請號： | 202110592248.1 | 申請日： | 2021-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN113308487B | 公開（公告）日： | 2022-10-21 |
| 發明（設計）人： | 許國晶;王志忠;張金路;馬汝芳;冷春梅;杜興華;鞏俊霞;李壯;田功太 | 申請（專利權）人： | 山東省淡水漁業研究院(山東省淡水漁業監測中心) |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/23;C12N15/24;C12N15/25;C12P21/02;C07K14/57;C07K14/54;C07K14/545;C07K1/22;A61K38/21;A61K38/20;A61P37/04 |
| 代理公司： | 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221 | 代理人： | 宋海海 |
| 地址： | 250013 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 多種 草魚 重組 細胞因子 及其 制備 方法 協同 增強 免疫 功能 中的 應用 | ||
1.草魚重組細胞因子IFN γ與IL-4或IFN γ與IL-1β在協同制備促進L8824細胞pIgR基因和/或蛋白表達的藥物中的應用；
所述草魚重組細胞因子IFN γ、IL-4和IL-1β制備方法包括：
（1）將草魚細胞因子目的基因連入載體質粒中構建細胞因子的重組表達載體；
（2）將上述重組表達載體導入宿主菌，獲得含細胞因子目的基因的重組菌株，誘導重組菌株表達，獲得草魚重組細胞因子；
所述步驟（1）具體方法包括：
采用基于PCR 的精確合成法，設計全長拼接引物，在引物的兩端各設計了保護性堿基合成基因IFN γGenbank：FJ695519.1、IL-4Genbank：KP896505.1和IL-1βGenbank：JN705663.2，并分別連入載體質粒中；
所述載體質粒為pET-28a，擴展引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1- SEQ ID NO.6所示；
所述步驟（2）中，所述宿主菌為大腸桿菌Arctic Express；
誘導重組菌株表達采用IPTG作為誘導劑進行，誘導誘導重組菌株表達方法為：誘導表達溫度為37℃，誘導表達時間為4h誘導劑為IPTG，所述IPTG的添加終濃度為0.5mM；
所述制備方法還包括對獲得的細胞因子重組蛋白進行變復性，所述變復性包含洗滌和溶解包涵體的步驟；
所述制備方法還包括純化步驟，所述純化方法包括采用Ni柱進行純化；
IFN γ與IL-4的質量比為0.1~2:1；
IFN γ與IL-1β的質量比為0.1~2:1。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，IFN γ與IL-4的質量比為為1:1。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，IFN γ與IL-1β的質量比為1:1。
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