[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110591961.4
• 申請(qǐng)日: 2021-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113429466B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張奇;李培武;唐曉倩
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/38
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/38;C07K1/107;C07K16/14;G01N33/68
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專(zhuān)利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發(fā)明涉及一種用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法。包括以下步驟：(1)取黃曲霉強(qiáng)產(chǎn)毒力菌株，制備獲得黃曲霉抗原；(2)將上述黃曲霉抗原免疫試驗(yàn)動(dòng)物，獲得納米抗體庫(kù)或單克隆抗體庫(kù)；(3)獲得不同產(chǎn)毒力的黃曲霉菌株的蛋白質(zhì)合并溶液，利用步驟(2)獲得的抗體庫(kù)中的抗體，檢測(cè)不同產(chǎn)毒力的黃曲霉菌株的蛋白質(zhì)，獲得系列檢測(cè)信號(hào)；(4)找出檢測(cè)信號(hào)與上述黃曲霉菌株產(chǎn)毒力呈現(xiàn)正相關(guān)的納米抗體，即黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子抗體，與黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子抗體對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)即發(fā)掘出的黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子。其可用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法，易操作，實(shí)用性強(qiáng)，容易推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物領(lǐng)域，涉及一種用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素毒性強(qiáng)、危害大，是污染食品種類(lèi)最多的污染物，近年總體呈現(xiàn)污染加重趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅食品安全和人民健康。黃曲霉毒素是自然界毒性最強(qiáng)的一類(lèi)真菌毒素，其中黃曲霉毒素B1是國(guó)際癌癥研究組織(International Agency for Research on Cancer,IARC)認(rèn)定的I類(lèi)致癌物，已引發(fā)過(guò)多起人畜群體中毒事件，成為肝癌病例高發(fā)的主要原因之一。根據(jù)近5年Web of Science檢索數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：黃曲霉毒素污染食品及原料種類(lèi)超過(guò)了110種，高居污染物首位。然而，迄今國(guó)內(nèi)外仍沒(méi)有黃曲霉毒素等微生物毒素污染前的分子預(yù)警研究范例，難以滿足事前預(yù)警的迫切需求。

現(xiàn)有黃曲霉毒素預(yù)警方法主要是基于黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)建立，用于毒素污染水平評(píng)價(jià)或產(chǎn)后污染程度與消費(fèi)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，一旦檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，污染往往已經(jīng)發(fā)生，難以滿足事前預(yù)警與指導(dǎo)防控的迫切要求。歐盟食品和飼料快速預(yù)警系統(tǒng)(Rapid Alert System forFood and Feed，RASFF)利用限量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)獲得食品與飼料中黃曲霉毒素含量，對(duì)各國(guó)輸入歐盟的食品與飼料進(jìn)行快速預(yù)警。美國(guó)研究機(jī)構(gòu)基于黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)與污染監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，研究建立了多元羅吉斯蒂回歸分析和疊加高斯處理等預(yù)警模型，主要用于評(píng)估產(chǎn)后玉米等農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素污染程度與消費(fèi)風(fēng)險(xiǎn)。

綜合國(guó)內(nèi)外近二十年研究進(jìn)展，當(dāng)前黃曲霉毒素早期預(yù)警分子不明是根本原因，而缺乏黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的高效發(fā)掘方法則成為共性瓶頸難題。針對(duì)這一瓶頸難題，發(fā)明人團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)十多年攻關(guān)研究，構(gòu)建了我國(guó)黃曲霉毒素產(chǎn)毒菌株庫(kù)、菌株產(chǎn)毒力數(shù)據(jù)庫(kù)、強(qiáng)產(chǎn)毒菌株蛋白質(zhì)抗體庫(kù)，由此發(fā)明了用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的抗體庫(kù)方法，為發(fā)掘黃曲霉毒素早期預(yù)警分子提供了一種高效的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法。其用于高效發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子，容易推廣應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

一種用于發(fā)掘黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子的方法，包括以下步驟：

(1)取黃曲霉強(qiáng)產(chǎn)毒力菌株，培養(yǎng)獲得菌株培養(yǎng)物和胞外分泌蛋白質(zhì)混合物；然后將菌株培養(yǎng)物細(xì)胞破碎，獲得胞內(nèi)蛋白質(zhì)混合物；將上述胞外分泌蛋白質(zhì)混合物和胞內(nèi)蛋白質(zhì)混合物合并，加入碳二亞胺偶聯(lián)獲得黃曲霉抗原；

(2)將上述黃曲霉抗原免疫試驗(yàn)動(dòng)物，獲得納米抗體庫(kù)或單克隆抗體庫(kù)；

(3)獲得不同產(chǎn)毒力的黃曲霉菌株的蛋白質(zhì)合并溶液，利用步驟(2)獲得的抗體庫(kù)中的抗體，檢測(cè)不同產(chǎn)毒力的黃曲霉菌株的蛋白質(zhì)，獲得系列檢測(cè)信號(hào)；

(4)找出檢測(cè)信號(hào)與上述黃曲霉菌株產(chǎn)毒力呈現(xiàn)正相關(guān)的納米抗體，即黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子抗體，與黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子抗體對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)即發(fā)掘出的黃曲霉菌株產(chǎn)毒力指示分子。

按上述方案，所述的黃曲霉強(qiáng)產(chǎn)毒力菌株是通過(guò)常規(guī)方法從自然界分離、鑒定，或者通過(guò)人工改造獲得，其產(chǎn)毒力經(jīng)NY/T 2311—2013標(biāo)準(zhǔn)方法鑒定結(jié)果不小于10μg/kg。